Tecnica Histologica

TÉCNICA HISTOLÓGICA

El objetivo de la Técnica Histológica es la preparación, apropiada de los distintos tejidos y órganos para su observación y estudio microscópico.

Esta técnica consiste una serie de pasos que son los que estudiaremos a continuación:

I Obtención de la pieza

II Fijación

III Deshidratación

IV Aclaración

V Inclusión

VI Microtomía

VII Coloración

VIII Montaje

OBTENCIÓN DE LA PIEZA.- Como primer paso, en cualquier Técnica Histológica e Histopatológica es tener la pieza que vayamos a estudiar, ya sea riñon, piel, hígado, cerebro, etc.

Se puede obtener de distintas maneras. Una de ellas es con el animal vivo, vgr:, al momento de una cirugía, se efectúa una biopsia. del órgano que deseemos estudiar, vgr de ovario para estudiar el proceso histológico de la ovogénesis.

Otra manera es la toma de la muestra con la necropsia del animal recién muerto, o a las pocas horas de fallecido. Esto se aplica en histopatología. Por ejemplo en el caso de un perro en el que se sospeche que haya padecido rabia. Se extrae el cerebro, y se efectúan los estudios histopatológicos con el fin de encontrar los cuerpos de Negri. patognomónicos de dicha enfermedad.

Una vez tomada la pieza histológica, debemos evitar el proceso de destrucción y putrefacción celular que ocurra en éstos tejidos, para lo cual nos valemos de ciertas substancias químicas que sabemos evitan ésta destrucción. Esto en el caso de la histología normal, es con el propósito de estudiar los tejidos con toda su estructura normal, con el mínimo de cambios microscópicos. Por lo que pasamos al siguiente paso:

II FIJACIÓN.- Los líquidos utilizados suspenden todas las actividades vitales de las células, evitando al máximo cualquier cambio en su estructura y morfología, a fin de no falsear su interpretación, manteniendo por lo tanto las células con los caracteres que tenían en vida.

Para ésto los fijadores deben Henar ciertos requisitos los cuales son los siguientes:

1.- Rapidez de acción- es decir, debe actuar inmediatamente, y evitar las retracciones y contracciones, para que no se alteren las formas de las células.

2.- Poder de penetración es decir, que fije tanto las capas superficiales como las más profundas.

3.- Conservar al máximo las características estructurales que las células presentaban en vivo.

4.- Favorecer o permitir los pasos ulteriores para su observación (microtomía, valoración, etc.).

5.- No provocar la aparición de fallas artificiales.

6.- No endurecer demasiado los tejidos ni tornarlos quebradizos.

Los fijadores, desde el punto de su composición química pueden ser: simples cuando es solo una substancia y compuestos ó mezclas cuando son varias substancias.

Los fijadores más utilizados son los simples, y de ellos el más comúnmente utilizado es el formaldehído (formol).

Formaldehido (formol).- Es el más utilizado en las preparaciones histológicas, ya sea al 4 ó al 10 %.

Sus características son las siguientes:

Tiene gran poder de penetración.

No entorpece la coloración ulterior.

Endurece favorablemente los tejidos.

Es reductor y no precipita las proteínas.

Conserva las grasas y los tejidos complejos, conservando las mitocondrias y al aparato de Golgi.

No produce contracciones de las estructuras celulares.

La fijación se obtiene en un plazo que varía de 1-4 días, de acuerdo al tamaño de la pieza.

Una vez fijadas las piezas, éstas están embebidas en agua lo que impide que sean penetradas por la parafina, ya que no es miscible en agua. Para que la parafina penetre en los tejidos es imprescindible, eliminar el agua de los tejidos o dicho de otra manera: deshidratarlos.

DESHIDRATACIÓN.- La deshidratación la obtenemos sumergiendo los tejidos en substancias anhidras. Para este fin se utiliza alcohol. Ahora bien, se deben colocar las piezas en alcohol de menor a mayor concentración, para evitar una deshidratación brusca. Por lo que se siguen los siguientes pasos:

Alcohol de 70o 3 Horas

Alcohol de 80o 3 Horas

Alcohol de 90o 3 Horas

Alcohol de 96o 3 Horas

Alcohol de 100o 3 Horas

Alcohol de 100o 3 Horas

Una vez terminada la deshidratación se procede al siguiente paso.

IV.- ACLARACIÓN.- Se sumergen las piezas en toluol o xilol. La substancia más comúnmente utilizada es el xilol.

Este paso se lleva a efecto en dos tiempos:

Xilol....................1-3 Horas

Xitol....................1-3 Horas

Hay un aparato, el cual efectúa los pasos del procesamiento de los tejidos, mediante un mecanismo automático. Este aparato es el HISTOKINETE, como el cual facilita notablemente, éstos pasos de la técnica histológica.

La pieza una vez fijada, deshidratada y aclarada se le efectúa el paso-previo a la microtomía: Inclusión. Este paso tiene como finalidad darle solidez a la textura de los tejidos, incluyendo una substancia sólida en el interior de los mismos, que sirva de sostén a los elementos anatómicos y que a su vez se preste para ser seccionada en cortes muy delgados.

La substancia más utilizada es la parafina. Esta parafina se funde en una estufa eléctrica o de gas.

Se procede a colocar la pieza en estudio en un pequeño vaso de plástico, en el cual se vierte la parafina, en estado líquido. Se coloca este vaso posteriormente en un refrigerador o bajo agua helada con el fin de que se solidifique. Dando como resultado un bloque de parafina como el que se observa en la Fig. 2-2. Ya solidificada se retira del vaso y se procede a quitar el excedente de parafina con un bisturí hasta obtener un pequeño bloque de forma más o menos cuadrilátera.

Se pasa rápidamente sobre su mechero encendido

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