Separación de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante cromatografía en capa fina

Separación de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante cromatografía en capa fina

Objetivos

• Emplear la técnica de cromatografía en columna para la separación de los pigmentos de la espinaca
• Como identificar los pigmentos de la espinaca mediante la técnica de cromatografía de capa fina
• Que eluyente es el mejor para identificar los pigmentos de la espinaca

Introducción

1. Cromatografía en capa fina. Esta es de aplicación analítica. Se utiliza comúnmente para seguir el desarrollo de una reacción (aparición de productos y desaparición de reactivos), para analizar el número aproximado de componentes de una muestra y por su valor como criterio de pureza e identificación. También es fundamental su utilización para determina el solvente de desarrollo adecuado para una cromatografía en capa preparativa, o para elegir la secuencia de solventes apropiado para al elución de los componente de una mezcla en columna Para realizar el análisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente sólido como gel de sílice (SiO2. H2O) o alúmina (Al2O3), unido a una placa rectangular de  vidrio o plástico. El adsorbente sirve de fase estacionaria. La muestra se aplica en disolución con un capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde. A continuación se introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes (fase móvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del líquido. El tanque contiene una atmósfera saturada en el disolvente para lo cual se introduce un trozo de papel de filtro que debe. La fase móvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los componentes de la mezcla, según su polaridad.
2. ¿Qué son los pigmentos? Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde, amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos químicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que presenta un determinado órgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinación de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prácticamente sin sufrir modificación.
3. ¿Qué pigmentos tiene la espinaca y que colores tienen estas?

Material

• Mortero
• Pipeta Pasteur
• Portaobjetos
• Tubo capilar
• Espátula
• Frascos para cromatografía con tapa

Sustancia y reactivos

• Sulfato sódico
• Hexano
• Etanol
• Sílice gel
• Acetona
• Hoja de espinaca

Procedimiento

 a. Preparación de la muestra En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de hexano y 2 ml de etanol. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto a un tubo de ensayo y agitar con mucha suavidad con una cantidad igual de agua, evitando la formación de emulsiones. Eliminar la fase acuosa con ayuda de una pipeta Pasteur, y el lavar sucesivamente dos veces con 2 ml de agua para eliminar el etanol. Transferir la fase orgánica a un tubo de ensayo y añadir con una espátula sulfato sódico anhidro para eliminar el agua.

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