Separación de lípidos empleando cromatografía en capa fina

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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS – ESPE.

Departamento de Ciencias de la Vida y Agricultura

Carrera de Agropecuaria  

Informe Práctico #12

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NRC: 9802

Elaborado por: Lopez Cañizares Luis  

Docente: Álvaro Petronio Gavilanes Quizhpi

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS EXACTAS

UNIDAD N° 2[pic 3]

INFORME DE PRACTICA N° 12

1. Tema: Separación de lípidos empleando cromatografía en capa fina

1. Objetivos.

• Estudiar e interpretar la cromatografía en capa fina aplicada a lípidos
• Elaborar la cromatografía para lípidos y pigmentos
• Determinar el respectivo coeficiente de reparto obtenido para las muestras de estudio

1. Marco teórico

Cromatografía en capa fina de lípidos

La cromatografía en capa fina tiene aplicación como método analítico, si bien puede también emplearse como técnica preparativa.

El estudio cromatográfico se basa, en esencia, en la aplicación de la cromatografía en capa fina sobre silicagel para la investigación de lípidos orgánicos. Se han estudiado tres grupos de componentes orgánicos:

• suero en su aspecto normal y patológico considerando las dislipemias primarias y secundarias.
• b) otros humores, como orina, LCR, bilis, saliva, plasma semill/al, derrames, pus y heces. En estos humores hemos estudiado su composición lipídica.
• c) Tejidos en los que hemos intentado establecer su “patrón lipídico”.

(Vilardel, 2005)

Los métodos de cromatografía en  capa fina (TLC) son un técnica analítica rápida, sencilla, económica y bastante eficaz, que permite determinar el grado de pureza de un compuesto como también comparar la similitud o diferencia entre dos muestras dependiendo del recorrido realizado en la placa por estas. (Anillo, Orozco, & Salgado, 2021)

El absorbente utilizado en esta práctica fue el gel de sílice, este se caracteriza por presentar un carácter polar. Principalmente es utilizando para separar sustancias polares como (alcoholes, aminas, ácidos carboxílicos). El proceso de adsorción debe a las interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o en algunos casos a los enlaces por puentes de hidrógeno que se da entre soluto y el adsorbente. (Anillo, Orozco, & Salgado, 2021)

Cabe destacar que la retención se basa en la competencia que se establece entre el soluto a separar y la fase móvil una vez esta se absorbe a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así, a medida que se produce la elución las moléculas de soluto que se encuentra adsorbidas van siendo desplazadas por la fase móvil. (Anillo, Orozco, & Salgado, 2021)

La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf (Relación de frentes), presentan un valor constante para cada compuesto y unas condiciones cromatrográficas específicas  como por ejemplo el tipo de adsorbente, las condiciones de las placas, variaciones en la temperatura y vapor de saturación. (Anillo, Orozco, & Salgado, 2021)

En éstos se han observan diferencias cromatográficas de acuerdo con su función, así en tanto, en tejido adiposo predominan los triglicéridos, en el tejido nervioso predominan fosfo y esfingolípidos y en el hígado hay una gran proporción de colesterol libre y esterificado. Se han estudiado muestras de tejidos procedentes de biopsias y de necropsias.

Se han estudiado asimismo la composición lipídica de diversos alimentos. Creemos que este estudio es importante:

• Por haber observado que nuestros resultados no siempre se parecen a los observados en tablas dedicadas a estas cuestiones.
• 2. Por ser interesante conocer la composición lipídica de los alimentos, para establecer un régimen conveniente en dislipémicos
• por ser la CCF un método ideal por su facilidad y rapidez para establecer una composición aproximada de un alimento.

 (Fiñana & Muñoz, 2014)

Lógicamente para establecer diferencias cuantitativas entre tipos de mantequillas o de aceites debe recurrirse a la cromatografía en fase gaseosa. El estudio de los lípidos humorales mediante CCF 'es fundamental en Laboratorios de Bioquímica Clínica, permitiendo el estudio en suero de los distintos parámetros lipídicos de una forma relativamente fácil: a) lípidos neutros: esteres de colesterol, esteres metílicos, triglicéridos, colesterol libre, AGL y fosfolípidos. b) Esteres de colesterol: palmitato y estearato, oleato, linoleato, linolenato, araquidonato y c) Fosfolípidos: cefalina, lecitina, esfingomielinas y lisolecitina. Además empleando la cromatografía en fase inversa pueden separarse los triglicéridos entre sí. Finalmente, con el silicagel silanizado puede conseguirse la separación de ácidos grasos. Por tanto mediante CCF se separan fácilmente 14 parámetros lipídicos y por métodos especiales 10 más (Triglicéridos y ácidos grasos), es decir un total de 24 compuestos lipídicos de suero. (Vives, 1972)

1. Materiales y equipos.

Materiales:

Dentro del laboratorio Virtual

• Micro pipetas
• Tubos de ensayo
• Papel cromatográfico
• Muestras
• Placa de silicagel

Equipos:

• Computador
• Conexión a Internet

1. Procedimiento

1. Lectura del material bibliográfico facilitado por el docente
2. Ingresar a los enlaces facilitados por el docente https://biomodel.uah.es/lab/cromat/TLC-lipidos.htm y https://biomodel.uah.es/lab/cromat/TLC-pigmentos.htm
3. Leer las instrucciones dentro de los simuladores para poder realizar los experimentos
4. Poner los datos adecuados para el desarrollo del experimento teniendo en cuenta los aspectos teóricos como la fase móvil y la fase estacionaria.
5. Se aplican muestras y patrones a la placa recubierta con gel de sílice (fase estacionaria de la cromatografía)
6. La placa se introduce en la cubeta que contiene fase móvil (mezcla de disolventes), se tapa y se espera a que la fase móvil ascienda; se detiene pasando a la etapa 3.
7. Se saca la placa, se espera a que se evapore el disolvente y se procede al revelado de los lípidos con vapores de yodo.
8. Observar los datos que nos da el experimento y anotar sus conclusiones

1. Actividades del laboratorio

Coeficiente de reparto de la muestra 1 y 2 en el experimento “Separación de lípidos por cromatografía de capa fina”

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