PRÁCTICA 5. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE PIGMENTOS EXTRAÍDOS DE TRIDAX PROCUMBENS Y TRIFOLIUM

PRÁCTICA 5. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE PIGMENTOS EXTRAÍDOS DE TRIDAX PROCUMBENS Y TRIFOLIUM.

INTRODUCCIÓN:

La técnica más comúnmente utilizada para la separación de los compuestos fotosintéticos de las plantas es la cromatografía en capa fina (en inglés TLC, Thin-Layer Chromatography), esta se basa en la separación de los analitos mediante las diferencias de velocidad a la que estos son transportados por una fase móvil líquida a través de una fase fija o estacionaria (la placa de TLC) (Vallejo et al., 2021). La separación de los componentes de la muestra se da principalmente por el fenómeno de la adsorción de tal modo que un compuesto de la fase líquida entra en contacto con el sólido adsorbente (donde se coloca un punto de muestra) y se adhiere a la superficie del mismo mediante una fuerza física (Vallejo et al., 2021). Los distintos componentes se pueden observar a simple vista ya que adquieren diferentes coloraciones a lo largo de la placa de TLC (De química, 2022). Los componentes de la muestra se separan dependiendo su polaridad, donde los más polares serán menos arrastrados por la fase móvil, ya que la fase estacionaria es altamente polar (Khan Academy, 2020). Esto define un factor de retención característico (RF) el cual es la relación de la distancia.

recorrida por el soluto entre la distancia recorrida por el solvente a lo largo de la fase estacionaria, tomando como punto de origen el punto de muestra (Khan Academy, 2020). Por lo tanto, se pueden determinar los pigmentos fotosintéticos de las plantas a través de la técnica mencionada tomando en cuenta sus factores de retención característicos (De Química, 2022), sus valores se encuentran en la tabla 1.1 en donde se utilizó una muestra de Tridax procumebs y Trifolium y una mezcla de hexano-acetona en proporción 70:30.[pic 1]

Un método de visualización comúnmente usado es exponer la placa de TLC con yodo; se crea una cámara de yodo añadiendo unos pocos cristales a una cámara que posteriormente se tapa, el yodo se sublima y reacciona con los compuestos de la placa, formando manchas de color amarillo-marrón (Química Fácil, 2020).

OBJETIVO

Preparar la fase estacionaria para la separación de componentes/pigmentos, empleando cromatografía de capa fina. Extraer y separar los componentes de Tridax procumbens y  Trifolium.

MATERIALES Y REACTIVOS 

• 2 vasos de precipitado de 250 mL
• 2 Tubos de ensaye
• 2 varillas de vidrio
• Pipeta serológica
• Bombilla de succión
• Mortero con pistilo
• Placa para cromatografía en capa fina
• Arena
• NaSO4
• Acetona
• Hexano
• Cámara de yodo

METODOLOGÍA

Se colocó 0.5 gramos de Tridax procumbens y  Trifolium en morteros diferentes; se agregó 1 gramo de arena, 0.05 gramos de sulfato de sodio anhidro y se molió cada una, se molió hasta que quedar una pequeña pasta verde intensa, la mezcla resultante se ubicó en tubos de ensaye con 2 ml de acetona y se dejaron reposar. Se tomaron aproximadamente ocho gotas de cada extracto con tubos capilares, las cuales fueron situadas en una placa de TLC. Las placas se acomodaron en vasos de precipitado y se agregó una mezcla de hexano y acetona 70:30, hasta que se mojó la parte inferior de las placas. Éstas se retiraron y se ubicaron en un bote con yodo resublimado.

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS

-TRIDAX PROCUMBENS

Las franjas de color obtenidas en el análisis por cromatografía de capa fina de la planta Lavandula sp. se muestran en la figura No.1

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Figura No.1: Cromatografía de capa fina de Tridax procumbens.

Se lograron identificar cinco compuestos, comparando el color de las franjas mostradas en la figura No.1 y los factores de retención calculados con la tabla 1.1, dichos resultados se muestran en la tabla No.2. Los factores de retención conseguidos se compararon con los reportados en la literatura como se muestra en la Tabla.No2

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En la tabla  se observa que para la feofitina b y la xantofila, se obtuvo un porcentaje de error menor al 10%, el cuál es el máximo valor aceptable para técnicas experimentales. Pero, en el caso de las clorofilas a y b , el error fue mayor al de tolerancia. Cabe resaltar que la clorofila fueron más arrastrados por la fase móvil. Según Torossi (2007), éstas son moléculas no polares y tienen un factor de retención mayor debido a que son muy poco retenidas por la fase estacionaria polar. Al realizar la inmersion en la camara de yodo, se obtuvieron pigmentos amarillos 2 extras a los que ya se tenian a lo largo de toda la placa como se muestra  en la figura No.2.

Tabla No.2: Comparación de Rf obtenido y Rf de la literatura acorde al pigmento y color en la tridax procumbens

Es importante mencionar la presencia de clorofilas a y b en la muestra. Torassi (2007) comenta que es posible la separación de clorofilas al añadir acetona, tal como se realizó en esta experiencia, pues si la fase móvil sólo estuviese constituida por un disolvente no polar como el hexano, las clorofilas no se podrían separar puesto que quedarían adsorbidas en el punto de aplicación.

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Figura No.2.- Inmersión de placas preparadas en yodo

–Trifolium

En los resultados obtenidos a partir del análisis de Mentha sp. por cromatografía de capa fina, se observaron distintas variaciones de colores a través de la fase estacionaria, como se muestra en la figura No.3. Los colores obtenidos hacen alusión a los compuestos que se encontraron en el analito, en donde, mediante el cálculo del factor de retención, se clasificaron los distintos compuestos (colores) mostrados en la revelación con la acción capilar del solvente.

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