La citotoxicidad Por LCR-ELA

Cambios celulares en cultivo celular de la neurona motora producidos por el líquido cefalorraquídeo citotóxica de pacientes con esclerosis lateral amiotrófica ☆

Cambios Celulares producidos Por La citotoxicidad del Líquido cefalorraquídeo de Pacientes Con esclerosis lateral amiotrófica Sobre Cultivos de Neuronas motoras ☆

U. Gómez-Pinedoa,,,,, M. Yáñezb, J. Matías-Guiua, L. Galana, A. Guerrero-Solaa, MS Benito-Martina, Á. Velaa, J.A. Arranz-Tagarrob, A. G. Garcíab

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DOI: 10.1016 / j.nrleng.2013.08.001

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U. Gómez-Pinedo, M. Yáñez, J. Matías-Guiu, L. Galán, A. Guerrero-Sola, MS Benito Martín, Á. Vela, J. A. Arranz-Tagarro, A. G. García

Cambios Celulares producidos Por La citotoxicidad del Líquido cefalorraquídeo de Pacientes Con esclerosis lateral amiotrófica Sobre Cultivos de Neuronas motoras

Neurología, Volumen 29, Número 6, julio-agosto de 2014, páginas 346-352

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abstracto

introducción

Los efectos neurotóxicos del líquido cefalorraquídeo (LCR) de pacientes con esclerosis lateral amiotrófica (ALS) han sido reportados por varios autores que han atribuido esto a la neurotoxicidad del glutamato en el LCR-ELA.

Materiales y métodos

Los cultivos de neuronas corticales embrionarias de rata fueron expuestos a LCR de pacientes con ELA durante un período de incubación de 24 horas. La microscopía óptica se utilizó para comparar los cambios celulares a los provocados por la exposición a 100 micras glutamato, y la microscopía confocal se utilizó para evaluar la inmunohistoquímica para la caspasa-3, TNF, y periferina.

resultados

En la cultura expuesto a CSF-ALS, observamos células con fragmentación nuclear y modificaciones estructurales escasos o nulos a los orgánulos citoplasmáticos o mantenimiento de la membrana de plasma. Esto no ocurrió en la cultura expuestos al glutamato. El cultivo expuesto a CSF-ALS también demostró aumentos de caspasa-3, TNF, y en periferina co-localización con la caspasa-3, pero no con TNF, lo que sugiere que TNF puede desempeñar un papel temprano en el proceso de apoptosis.

Conclusiones

CFS-ALS citotoxicidad no está relacionada con glutamato. Inicialmente afecta el núcleo sin alterar la membrana citoplasmática. Esto causa apoptosis citoplasmática que implica un aumento de la caspasa-3 co-situado, con periferina, que también se sobreexpresa.

Resumen

Introducción

Los Efectos neurotóxicos del Líquido cefalorraquídeo (LCR) procedentes de Pacientes Con esclerosis amiotrófica lateral (ELA) de han Sido descritos Por Varios Autores Que de han atribuído this neurotoxicidad al efecto de glutamato del LCR-ELA.

Métodos y materiales

Se han del Expuesto Cultivos de Neuronas corticales embrionarias de rata ONU de la estafa Incubación de 24 hy el LCR Procedente de Pacientes Con ELA, valorando las Alteraciones Celulares una Través de microscopía Óptica en comparacion Con Aquellas Que producen estafar a 100 mM de glutamato y la inmunohistoquímica de caspasa- 3, TNF y periferina un Través de microscopia confocal.

Resultados

En El Cultivo Expuesto un LCR-ELA sí observan Células estafa fragmentación del núcleo Con escasa o nula Modificacion Estructural de los organelos citoplasmáticos y Mantenimiento de la membrana plasmática, Lo que no Ocurre Con la Exposición un glutamato. Se OBSERVA UN Aumentó de caspasa-3 y de TNFa y la ONU Incremento de periferina Que co-Localiza estafa caspasa-3 Pero no hay aire TNFa, he aquí Hace sugerir Puede que la ONU Tener Papel precoz en el Desarrollo de la apoptosis.

Conclusiones

La citotoxicidad Por LCR-ELA No Se Relaciona Con El glutamato, Que Provoca Una afectación pecado precoz nuclear Alteración de la membrana citoplasmática produciendo Una apoptosis citoplasmática Que conlleva la ONU Incremento de caspasa-3 Que co-Localiza estafa sobreexpresión anómala de periferina.

Palabras clave

La esclerosis lateral amiotrófica; El líquido cefalorraquídeo; La neurotoxicidad; periferina; Caspasa-3; TNFa; glutamato

Palabras clave

Esclerosis lateral amiotrófica; Líquido cefalorraquídeo; neurotoxicidad; Periferina; Caspasa-3; TNFa; glutamato

introducción

Un rasgo específico de líquido cefalorraquídeo de pacientes con esclerosis lateral amiotrófica (ALS-CSF) es su capacidad para disminuir la supervivencia celular en cultivos celulares de las neuronas motoras. Esto se conoce como el effect.1 citotóxico Este efecto se limita a la CSF2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8, y se ha demostrado por studies.9 repetida, 10, 11, 12 y 13 En una anterior estudiar, 14 observamos este mecanismo en cultivos de células neuronales y nos pareció ser-glutamato independiente después de la exposición a diferentes culturas antagonistas. El propósito de este estudio es determinar qué se producen cambios celulares en cultivos de células neuronales expuestos a CSF-ALS.

Materiales y métodos

El uso de la punción lumbar, se extrajeron CSF a partir de 3 pacientes diagnosticados de ALS de acuerdo a la El Escorial / Airlie House diagnóstico Criteria.15 Se extrajeron 1,5 a 3 cc y se centrifuga, se cuantifica, y se almacena la muestra a -80 ° hasta que fue expuesta a la cultura. También se extrajeron LCR de 3 controles que se habían sometido a una punción lumbar, como parte del procedimiento de diagnóstico después de dolor de cabeza o un ataque epiléptico. Todos los pacientes y controles firmaron un formulario de consentimiento informado.

Los procedimientos de extracción y mantenimiento de cultivos de neuronas motoras de ratas embrionarias siguieron el protocolo descrito previamente por Yáñez et al.14 En primer lugar, los cultivos fueron expuestos a CSF-ALS, control de CSF y 100 mM de glutamato, y también mantienen una cultura de línea de base. Se incubaron durante 24 horas y se analizaron con un microscopio óptico y métodos inmunohistoquímicos.

Los estudios inmunohistoquímicos después de la fijación de células implicó el uso de anticuerpos anti-caspasa-3 (1: 200, Millipore, 04-1090), anti-TNF antibodiesα (1: 100, Abcam ab66579), los anticuerpos anti-periferina (1: 500, Millipore, AB9282 ), y la FLUOROPAN neuronal marcador para etiquetar todas las células de origen neural (1: 100, Millipore MAB2300 ×). Las células fueron incubadas con anticuerpos secundarios pertinentes (Alexa 488, 555, o 647, 1: 500, Invitrogen). Los núcleos fueron posteriormente contrastado con DRAQ5 (1: 3000, Abcam, ab108410). Contraste de fase y de formación de imágenes de inmunofluorescencia se realizaron con

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