Manual De Calidad ISO9000

Objetivos:

Llevar a cabo la técnica de cromatografía en columna y en capa fina

Familiarizarse con la técnica y obtener conocimientos cromatograficos: polaridad, fase móvil, fase estacionaria, factor de retención, etc.

comparar la eficacia de la separación cromatográfica en capa fina y en columna

Observar el efecto de diferentes fases móviles y estacionarias en la separación

Determinar los valores de R_f, como un parámetro en la identificación de los compuestos separados para conocer el grado de afinidad.

Determinación de los componentes orgánicos presentes en un pigmento de origen vegetal, bugambilia.

Resultados:

Experiencia 1 Cromatografía en columna

La cromatografía se llevó acabo con el extracto de Bugambillia.

Fracciones coloridas obtenidas: 0

Se obtuvo una separación al principio de la columna, teniendo un color fucsia y anaranjado, que permanecieron estacionarias en esa parte.

Al igual se observo un color verde, muy poco perceptible el cual avanzo de una forma lenta por toda la columna, pero en su recolección no se observo el color

Experiencia 2 Cromatografía en placa fina

El pigmento de bugambilia se separo en placa fina con una solución de …. , esta separación solo pudo observarse con luz UV, quedando 4 anillos de color morado tenue en la parte superior.

Analisis de resultados

La cromatografía de nuestro extracto de bugambilia no se llevo a cabo correctamente en columna porque seguramente nuestro solvente o nuestro extracto contenían agua, esto se pudo observar ya que la sílice se comenzó a hidratar y se expandió, quedando la fase estacionaria convertida en gel.

También, las betalaínas, presentes en la bugambilia tienen bajos coeficientes de retención (Rf), por lo que una cromatografía en capa fina (TLC) no es la técnica eficaz para su separación. Sin embargo si se hubiera llevado a cabo una buena investigación de la bugambilia se podía encontrar que al desarrollar un sistema en una placa revestida con celulosa usando como fase móvil isopropanoletanol-agua-ácido acético en una relación de 6:7:6:1, la movilidad de la betalaína en la placa se facilita debido a la protonación del grupo carboxílico de la betacianina y el anión carboxilato que proporciona un sistema eléctricamente neutro por su interacción con el nitrógeno cuaternario. En estas condiciones, se logra separar también las betaxantinas en placas de celulosa dietilaminoetil y se observan los pigmentos claramente en la placa de TLC, lo cual no ocurrió.

Los solventes adecuados para la extracción de bugambilia se deben determinar teniendo en cuenta la toxicidad del solvente, además de evaluar la separación del colorante mediante el uso de una lámpara UV, para esta extracción la mezcla de agua etanol 1:3 genera una mejor

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