ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA UREASA

[pic 1]UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

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LABORATORIO N°2

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA UREASA

EXPERIENCIA CURRICULAR BIOQUÍMICA AMBIENTAL DOCENTE

ASPAJO VILLALAZ, CINTHYA LISSETT

INTEGRANTES

AUCAYLLE MENDOZA SANDRO VALDEMAR BRICEÑO BERMUDEZ CANDY YERALDINE CAPRISTAN REYNA LUCERO ANGELICA FLORES QUIROZ RUSVEL ALDAIR

GARCÍA ULLOA OLGA AZUCENA

CICLO

V – SECCIÓN “B”

TRUJILLO – PERÚ 2022

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[pic 4]DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA UREASA

1. INTRODUCCIÓN

Las enzimas se definen como catalizadores solubles de naturaleza orgánica y estado coloidal producidos por células vivas que funcionan independientemente de ellas. Tienen capacidades catalíticas específicas y son destruidos por el calor húmedo a 100 °C. (Alef y Nannipieri, 2015).

En términos químicos, todas las enzimas conocidas son proteínas. Consisten en una parte de proteína y un grupo "protésico" adicional. A veces, el grupo prostético se puede eliminar de forma reversible; en estos casos, la proteína se llama apoenzima y el grupo prostético se llama coenzima Entre los componentes proteicos, la especificidad de la actividad sobre un sustrato particular es lo primero, determinando cuáles se modificarán y cuáles no. El grupo protésico también determina el curso de la reacción -la especificidad de la acción-, es decir, polariza su actividad para realizar una única reacción entre las diversas posibilidades que la molécula puede experimentar sobre el sustrato. (Alef y Nannipieri, 2015).

La actividad enzimática se evaluó en base a la velocidad de reacción. La cinética enzimática estudia la velocidad de una reacción, los factores que la modifican y los mecanismos por los que se modifican. Los factores físico químicos que modifican la actividad enzimática son: concentración de sustrato, concentración de enzima, pH, temperatura, fuerza iónica, inhibidores. (Quintero, 2012).

La ureasa, aislada y cristalizada, se puede aislar de plantas, mohos y bacterias y no está presente en células de mamíferos. Esta enzima actúa sobre enlaces carbono-nitrógeno (CN) distintos de los enlaces peptídicos y cataliza la siguiente reacción:

UREA + H2O → CO2 + 2NH3

Puede ser inhibido por metales pesados como iones de plata y mercurio. Se ha señalado que agentes reductores suaves como los sulfitos provocan su inactivación reversible. Una unidad de ureasa se define como la enzima que libera 1 micromol de amoníaco por minuto a partir de la urea en condiciones de prueba específicas de pH y temperatura. (pH 7.2 H y temperatura (pH 7.2 y 37°C). y 37°C) (Mendoza,2005).

Basándonos en los conceptos definidos, esta práctica experimental tiene como objetivo: Demostrar la actividad enzimática, determinando para ello la actividad de ureasa, para esto se emplean dos métodos, el sistema de incubación, el cual consistirá en aplicar una temperatura de 37°C a dos soluciones con ciertas características como pH y concentración de sustrato, de las cuales estará en función a una enzima, que a partir de la titulación con HCl se podrá observar la reacción que se dará. Por otro lado, está la cuantificación del producto formado por la reacción de Nessler que nos permitirá conocer la cantidad de NH3 formado.

[pic 5]Además, se pondrá en práctica nuestra capacidad de observación haciendo un seguimiento desde el primer momento en que se prepararon las soluciones y durante cada parte del proceso. Los resultados se recopilaron en una tabla, adjuntando fotografías para una mejor apreciación, las discusiones planteadas son complementadas con bibliografía relacionada y otras fuentes de información, además de profundizar más los conocimientos adquiridos en la ejecución del experimento. Durante el proceso se respetaron lineamientos de bioseguridad para la prevención y control de la propagación del Covid-19 durante la parte experimental.

1. OBJETIVOS

• Demostrar la actividad enzimática, determinando para ello la actividad de ureasa.

1. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIAL BIOLÓGICO:

• Enzima ureasa (E.C.3.5.1.5. Urea amidohidrolasa)

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Figura N°1: Producto Ureasa Fuente: Chemwhat.

MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO

• Gradillas para tubos

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Figura N° 2: Gradillas para tubos de ensayo Fuente: Química laboratorios.

• Tubos de ensayo de 13 x 100 mm (07)

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Figura N°3: Tubos de ensayo de laboratorio Fuente: grupoquimiacorp.

• Pipetas de 1 mL (02; una al 1/100), 2 ml, 5 ml y 10 ml

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• Baño María a 37°C

Figura N° 4: Pipera graduada Fuente: Tplaboratorioquimico.

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Figura N° 5: Baño maría Fuente: chemwhat.

• Goteros o pipetas descartables de plástico

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Figura N° 6: Pipetas desechables de transferencia de plástico

Fuente: canfortlab.

• [pic 13]Pizeta con agua destilada

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Figura N° 7: Piseta Fuente: Tplaboratorioquimico.

• Espectrofotómetro o fotocolorímetro

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Figura N° 8: Espectrofotómetro Fuente: Elaboración propia

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