Bacteria Echerichia Coli

Tema:

Escherichia Coli

Objetivo General:

Determinación de coliformes fecales y las pruebas confirmativas de Escherichia coli e identificación de la bacteria en una de alimento (leche).

Objetivos Específicos:

Determinar las pruebas presuntivas, confirmativas y bioquímicas (IMVEC).

Identificar la bacteria de Escherichia coli (color rojo)

Marco Teórico:

Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras

Coliformes fecales: Es un grupo de coliformes que en presencia de sales biliares u otros agentes selectivos equivalentes fermenta la lactosa con producción de ácido y gas a temperatura entre 44 y 44,50C. Este grupo contiene una alta proporción de E. Coli, tipo I y II y que en general pueden considerarse como equivalente a E. Coli, siendo por ello útiles como indicadores de contaminación fecal en los alimentos.

E. coli: Es una especie bacteriana que a más de presentar las características del grupo coliforme fecal, produce indol a partir del triptófano; es positivo a la prueba del rojo de metilo y negativo a la de Voges Proskauer; no utiliza el citrato como única fuente de carbono. Las cepas indol positivas se llaman E. Coli tipo I y se supone que se hábitat natural primario es el intestino.

Diferenciación de coliformes fecales: Es el proceso realizado para confirmar la presencia de E. Coli y diferenciar las especies y variedades del grupo coliforme fecal mediante el conjunto de pruebas bioquímicas conocidas como “IMVEC”.

IMVEC: es una designación mnemónica de un grupo de cinco pruebas bioquímicas que consisten en:

I = Verificación de la producción de indol a partir del triptófano.

M = Reacción del RM (rojo de metilo) para comprobar el descenso del pH del caldo glucosa.

V = Reacción de VP (Voges-Proskauer); para comprobar la producción de acetoina a partir de glucosa.

E = prueba de Eijkman, para comprobar la termotolerancia o crecimiento a 44-45,5 0,2oC

C = Utilización del citrato como fuente de carbono.

EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO:

Matraz

Cajas Petri

Vidrio reloj

Vasos de precipitación

Pipetas

Tubos de ensayos

MEDIOS DE CULTIVOS:

Caldo Escherichia coli ( E.C)

Agar Lauril triptona

Agar Mac Conkey

Rojo de metilo

Agar citrato de Simons

Caldo MR-VP

PROCEDIMIENTO:

Esterilizamos los materiales de vidrio con los cuales íbamos a trabajar para desinfectar y eliminar todo tipo de bacteria para lo cual utilizamos como métodos de esterilización el horno y el autoclave

Realizamos la preparación del caldo de E.C (ver preparación en el envase; 200ml-7,4g)

Separar en una gradilla los tubos de ensayo a utilizar en la distribución de 3x3 colocando 10ml del caldo dentro de cada tubo

Rotulamos los tubos con las disoluciones de 10, 1 y 0,1 (muestra de leche)

En las 3 series conformadas, cada una de las series por 3 tubos y en total 9 los cuales en su interior contienen caldo EC.

En la primer serio de tomamos 1ml de la muestra (leche) y la colocamos en 3 tubos de ensayos con 9ml de caldo EC con la serie 101

En la segunda serie volvemos a colocar 1ml de la muestra en 3 tubos de ensayos con 9ml de caldo EC con la serie 10o

Para la última serie se toma 1ml de cada tubo de ensayo de la serie 10o para colocarla en 3 tubos distintos con calo EC especificando que es

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