Brilliance Listeria

ÍNDICE

Día 14/11/2012 3

Material utilizado 3

Procedimiento 4

Día 28/11/2012 6

Procedimiento 6

DÍA 5/12/2012 8

Resultados 8

BIBLIOGRAFIA. 9

Libros y otros 9

Páginas web 9

Día 14/11/2012

Material utilizado

- C10: 2% Citrato trisódico

- Medios: Brilliance Listeria, Fraiser y VRBA (con respectivos enriquecedores del medio)

- Agua de peptona.

- Tubos de ensayo, placas de Petri.

- Pipetas.

- Asas de siembra.

- Micropipetas.

- Bolsa esterilizada y Stomacher.

- Olla a presión y estufas.

Imagen: Brilliance Listeria

Procedimiento

Preparación de medios enriquecidos para Listeria

1.Medio Listeria: (Brilliance Listeria): denominado anteriormente Oxoid agar cromogénico Listeria (OCLA). Es un medio para el aislamiento, enumeración e identificación presuntiva de especies de Listeria, en concreto de Listeria monocytogenes a partir de muestras de alimentos. Para la elaboración de las placas de Petri para el cultivo de Listeria monocytogenes, homogeneizamos 16,83 g del medio en 250 ml del agua, utilizando un matraz aforado de 500 ml. A continuación, introducimos en el matraz, una uña magnética para agitar, utilizando el agitador magnético durante varios minutos.

2.Medio Fraser: Es un medio secundario selectivo de enriquecimiento de diagnóstico para el aislamiento de Listeria spp. a partir de muestras alimenticias y ambientales. Homogeneizamos 12,9g del medio y 225ml de agua en un matraz aforado de 500 ml. Se introduce en el matraz, una uña magnética y se agita en el agitador magnético durante varios minutos.

A continuación, esterilizamos en una olla los medios a 121ºC durante 15min con un posterior enfriamiento a 50ºC de forma natural, no forzada (sin aplicación de agua fría del grifo a la olla)

Imagen: Olla a presión.

En el primer medio (Brilliance Listeria ), se añade la mitad de un suplemento, al que hay que añadir 2ml de agua y la mitad de otro suplemento (SRO228E).

Al otro medio, (Medio Fraser) añadir un suplemento (Half Fraser) al que hay que añadir 2ml de agua y 2ml de etanol par su preparación.

En la primera imagen se muestra uno de los pasos de la preparación del medio brilliance listeria.

En la segunda, se muestran los suplementos que añadimos a dichos medios. (la primera de ellos se añade el medio fraser y los dos siguientes al medio Brilliance Listeria).

Preparación de las diluciones

Utilizamos un medio (citrato trisódico al 2%) al cual le añadimos 4,6g y lo mezclamos con 225ml de agua. Se homogeniza en un agitador y se introduce una uña magnética en el matraz, facilitándolo.

Preparación del diluyente. Agua de peptona

Mezclamos 0,1g de peptona y 100ml de agua. Con el agua de peptona procedemos a rellenar con 9ml de la misma, cada tubo. Posteriormente procedimos a su incubación en la olla.

Imagen: pipeteador automático

Día 28/11/2012

Procedimiento

Preparación del medio VRBA

El VRBA es un medio basado en VRBLA (Violet Red Bile Lactose Agar) el cual es un medio selectivo para la detección y la enumeración de coliformes. El medio ha sido usado para la determinación de coli-aerógenos contenido en agua, leche, otros productos lácteos, y productos alimenticios, etc.

Los organismos rápidamente producen colonias

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