CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN ALTA RESOLUCION(HPLC)

CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN ALTA RESOLUCION(HPLC)

HISTORIA

A comienzos del año 1903, el botánico ruso Mijaíl Tsweet usó columnas de adsorción de líquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de la columna. Los primeros equipos de cromatografía de gases aparecieron en el mercado a mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC: High pressure liquid chromatography) comenzó a desarrollarse en los años 1960, aumentando su importancia en las décadas siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica más empleada. Sin embargo esto se irá modificando con el paso de los años

DEFINICION

La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.

La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentes velocidades con que se mueve cada una de ellas a través de un medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento.

• Elementos que participan en una cromatografía

1. Fase estacionaria

2. Fase móvil

3. Muestra

En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase móvil) que no puede mezclarse con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" a las moléculas en la muestra.

Fase móvil y Fase estacionaria •

Fase móvil: es un disolvente liquido que contiene la muestra como mezcla de solutos.

• Fase estacionaria: es donde se retienen los componentes provenientes de la fase móvil y esta compuesto de un material poroso que tiene afinidad por las partículas.

• 5. TIPOS DE CROMATOGRAFIAS LIQUIDAS

• Hay varias formas de interacción entre las cuales tenemos:

• 6. Adsorción superficial

• 7. Partición

• 8. Intercambio iónico

• 9. Exclusión por tamaño

Dependiendo del tipo de fase fija y del tipo de fenómeno físico que provoca la separación, la cromatografía líquida de alta resolución puede ser:

1. Cromatografía de adsorción: La fase fija es un sólido y se utiliza casi exclusivamente sílice (sílica) y en mucha menor medida alúmina.

Significado de sílice

es un gel sólido y duro.

El gel de sílice, también conocido como Silicagel, es un producto absorbente, catalogado como el de mayor capacidad de absorción de los que se conocen actualmente.

La alúmina es el óxido de aluminio (Al2O3). Junto con la sílice, es el componente más importante en la constitución de las arcillasy los esmaltes, confiriéndoles resistencia y aumentando su temperatura de maduración.

1. Adsorción. Fenómeno de superficie que ocurre por la interacción física o química de un adsorbente de un adsorbato.

2. Partición. Es el fenómeno de reparto de un soluto en 2 fases distintas.

3. Intercambio Iónico. Es un fenómeno generado por la interacción electrostática entre moléculas cargadas eléctricamente.

4. Exclusión. Es un fenómeno físico que consiste más que nada en separar moléculas en base a su tamaño molecular.

APLICACIONES

• • Tiene grandes aplicaciones en lo que se refiere a la contaminación ambiental la HPLC se utiliza para analizar la capacidadque tienen algunos pesticidas (insecticidas, larvicidas, herbicidas, etc.)

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• El análisis de medicamentos constituye la Aplicación mas grande de la Cromatografía HPLC que nos sirve para determinar los componentes activos de diferentes productos usados en la Industria Farmaceutica como por ejemplo en tabletas analgésicas.

• Conservantes antioxidantes:  Se usa el gradiente de HPLC con un detector colorimétrico para medir simultáneamente los nueve antioxidantes más comunes Hipoclorito , iodo ..etc Carbohidratos simples:  Usar HPLC con ELSD elimina la necesidad de usar bases fuertes o alto pH, convirtiéndose en un método no destructivo. . Aplicación al análisis de alimentos

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• 51. La adición de mono y

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