Colaborativo Morfologia

INFORME DELABORAQTORIO

MICROBIOLOGÍA

PRACTICA 5.

NOMBRES

ANDRES ARANGO TAPIAS

MARISOL HENAO LONDOÑO

YEHIMY CAROLINA CARDONA CORRALES

MONICA MARIA VILLEGAS DUQUE

FABIAN PÈREZ CARDONA

Grupo

1

PRESENTADO A

ROBINSON SALAZAR

ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS TECNOLOGÍAEINGENIERÍA

CEAD- MEDELLÍN

20/09/14

PRACTICA 5. TÉCNICAS DE TINCIÓN

1. Objetivos

Preparar frotis de bacterias para observaciones microscópicas

Observar las bacterias teñidas al microscopio y clasificarlas por su forma y su reacción a la coloración de Gram.

2. Introducción

La observación microscópica de las bacterias se facilita cuando han sido coloreadas. Se acostumbra fijar las bacterias en la lámina portaobjetos para poder teñirlas con facilidad.

La fijación puede hacerse con solventes o con calor. En cualquier caso se trata e deshidratar la célula y coagularla con proteínas.

Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o compuestas cuando se utilizan 2 ó más colorantes. También se puede hacer una coloración negativa en la cual se tiñe el fondo, además de la bacteria, para poder observar la cápsula.

3. Procedimiento

3.1 Coloración Simple

Para la coloración simple se utiliza azul de metileno y se trabaja con Staphylococcus aureus. Se toma una pequeña muestra del microorganismo y se fija con calor, posteriormente se añade una gota pequeña de azul de metileno, se coloca la laminilla o cubre objetos y se observa al microscopio en un aumento de 100x.

3.2 Tinción de Gram

La tinción de Gram se realiza en cultivos de Staphylococcus aureus, y Escherichia coli.

La tinción de Gram. Es una coloración compuesta porque en ella se utilizan 2 colorantes, uno primario: cristal violeta o violeta de genciana y uno de contraste, safranina o fucsina de Gram. Es una tinción diferencial porque según la composición química de la pared celular las bacterias quedan teñidas con el cristal violeta o la safranina, como mordiente o sustancia fijadora del color se utiliza lugol.

El agente diferenciador, es decir, el que actúa de modo diferente sobre la pared celular de las Gram. Positivas y las Gram negativas es la solución alcohol cetona ó alcohol- ácido.

Los pasos de la tinción de gran son los siguientes:

 Fijar la muestra al calor

 Añadir el violeta de genciana o cristal violeta y dejarlo actuar durante 1minuto

 Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante

 Añadir lugol y dejarlo actuar durante 1 minuto

 Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante

 Añadir alcohol- ácido y dejarlo actuar durante 15 segundos y lavar rápidamente con agua

 Añadir fucsina y dejar actuar durante 5 minutos

 Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante

 Secar al aire libre o con una toalla absorbente según las indicaciones del profesor

 Observar en el microscopio a un aumento de 100x.

Observe todas las bacterias con las diferentes coloraciones, determine su morfología y trate de identificar sus partes, determine si son bacterias Gram. Positivas ó bacterias gran negativas. Dibuje lo observado.

1. Resultados

Observe las colonias y basándose en la figura 1, llene los datos de la tabla describiendo las características de las colonias y la cantidad de crecimiento (mucho, abundante, regular, poco). Describa 2 colonias de cada caja teniendo en cuenta las siguientes características:

Tamaño

Forma: circular, irregular, extendida

Color: pigmentada, incolora

Textura: Granular, friable, húmeda, seca, membranosa.

Superficie: suave, áspera, rugosa, opaca, resbalosa.

Elevación: Plana, convexa, Umblicada.

Borde: irregular, aserrado, discreto, regular, entero ondulado,

Olor: inodora, aromática desagradable.

TABLA 1. CARACTERÍSTICAS DE LAS COLONIAS

COLONIA COLONIAS ENCONTRADAS BORDE TAMAÑO FORMA COLOR TEXTURA SUPERFICIE OLOR ELEVACIÒN

1.medio saboraud muestra de cabello en estría

(ver figura 1) 0 No se formaron colonias, No se observa No se observa No se observa No se observa No se observa No No se observa

1 medio nutritivo muestra de cabello. En estría.(ver figura2)

1 espiculado Mediano Puntiforme Negro Granulada Áspera desagradable Planoconvexa

2 redondeada Pequeña circular blanco húmeda suave desagradable plano

2. medio saboraud muestra de la mesa. En rejilla. (ver figura1) 1 filamentosa Grande filamentosa Blanco-negro granulada rugosa no planoconvexo

2. medio nutritivo de la muestra de la mesa. En rejilla.(ver figura 3) 1 especulada Grande puntiforme Negro-blanco granulado áspera desagradable planoconvexo

2 redondeada Pequeña circular blanca húmeda suave desagradable plano

3.medio ambiente(ver figura 4) 1 filamentoso Mediana y pequeña

filamentosa Blanco y negro friable suave inoloras plana

2 filamentoso Mediana filamentosa blanca friable suave inoloras plana

3 redondeado Pequeña circular pigmentada húmeda suave inoloras convexa

4 redondeado Pequeña circular oscura húmeda opaca Inoloras plana

Tinción

Tinción simple, bacteria( ver figura 5) La muestra se toma de la colonia tres, cultivo ambiente.

Se observa en el microscopio bajo el lente de 40x, se observa bacilos, estreptobacilos, diplobacilos.

Tinción simple, hongo.(ver figura 6)

La muestra se toma del cultivo dos de saboraud, se observa en

4x se observan claramente una hifa y esporas.

10x se observa lo mismo que la 4x, con un poco más de claridad.

40x se observa más cantidad de esporas, la hifa con mayor definición y esporangios.

Tinción de Gram.(ver figura 7) La muestra se toma de la colonia tres, cultivo ambiente.

Se observa en el microscopio bajo el lente de 40x, se observa bacterias Gram positivas en forma de: bacilos, estreptobacilos, diplobacilos.

En la muestra de cabello de saboraud no se formaron colonias, ni cambios, la toma de la muestra no fue la adecuada.

Figura 1. Muestra de cabello1 y 2 muestra de la mesa en medio de saboraud.

Figura 2. Muestra de cabello en el medio nutritivo.

Figura 3. Muestra de la mesa en medio nutritivo.

Figura 4.

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