Control de calidad interno

Introducción

Las proteínas son un constituyente muy importante de las células y los tejidos del cuerpo humano; son así proteínas las enzimas, hormonas, la hemoglobina, el LDL, el fibrinógeno, las inmunoglobulinas, entre otras. Cuya concentración oscila entre 6,6-8,3 g/dl.

Las proteínas plasmáticas tienen la función de mantener la presión osmótica coloidal del plasma, evitando así la pérdida de líquido hacia los tejidos.

La determinación de la concentración de este analito es útil en la detección de una Hiperproteinemia e hipoproteinemia; teniendo una connotación clínica más importante la hipoproteinemia, que corresponde a una disminución de proteínas en suero, común en estados patológicos como: Síndrome Nefrótico, hemorragias severas o quemaduras extensas, estado de hambre o deficiencia por mala absorción intestinal, insuficiencia hepática. La hiperproteinemia puede darse por deshidratación, diarreas, vómitos o por causas artificiales, como estenosis venosa durante la extracción de sangre.

La albumina y las inmunoglobulinas son las proteínas plasmáticas mas predominantes en el pasma, siendo la albumina la que se encuentra en mayor proporción (60%), seguida de las inmunoglobulinas (35%) y el 5% restante la conforman otras proteínas plasmáticas como el fibrinógeno.  Por lo tanto, un índice cuantitativo de estas, indica indirectamente que estructuras del cuerpo podrían estar fallando, o cuales podrían verse afectadas debido a la baja. Un índice bajo de albúminas podría indicar una falla a nivel hepático (ya que ahí es donde se sintetizan). O también podrían ser signos de un síndrome Nefrótico, caracterizado por el descenso de iones negativos en el nefrón. Haciendo que la albúmina, con carga negativa, pueda pasar a través del nefrón, y eliminarse en la orina (esto no debería suceder). Y como consecuencias de esto, podrían ser bajas en la presión osmótica sanguínea, fallas en el metabolismo celular, en los nervios, entre otras estructuras. 

Ahora bien si se detecta una alteración en la cuantificación de proteínas totales, se recomienda realizar Electroforesis de Proteínas Séricas; como su mismo nombre lo indica se realiza con suero y no en plasma por tener fibrinógeno; la cual otorga información acerca del aumento o disminución relativa de proteínas así como la homogeneidad de una fracción. Este método se realiza en acetato de celulosa a un pH 8.9, al cual se le aplica corriente y nos permite discriminar 5 grandes fracciones: Albúmina, alfa-1-globulinas, alfa-2-globulinas, beta-globulinas y gamma-globulinas. Gracias al densitómetro se puede sacar la relación porcentual de cada fracción y poder estimar que patología estaría afectando al paciente si hay una alteración en las fracciones proteicas normales.

Por esta razón en clínica es importante la cuantificación de proteínas totales, utilizando métodos colorimétricos como: Biuret, Folin-ciocalteau, Azul de Comassie, ninhidrina, etc.; siendo el más usado y el que se usó en este laboratorio el Método de Biuret. Este método se basa en la reacción entre los nitrógenos amídicos de los enlaces peptídicos proteicos y los iones cobres en una solución alcalina, formando enlaces de coordinación que constituyen un complejo de color violeta cuya absorbancia es proporcional a la concentración de proteínas presentes en la muestra.

Por otro lado para poder asegurar nuestro método y poder otorgar valores fidedignos debemos cumplir con los requisitos de la calidad, basados en un control de calidad interno y un control de calidad externo. El control de calidad interno se asegura pasando los controles diarios para valorar nuestra calibración del método, el cual nos advierte de cambios en este, otorgándonos nuestra imprecisión (error aleatorio).  Por otro lado, en el control de calidad externo el laboratorio se compara con otros laboratorios que ocupan nuestro mismo método, equipo, reactivo, etc. para así obtener nuestro sesgo el cual indica la inexactitud (error sistemático).

Los datos estadísticos que se obtienen en el laboratorio son media, desviación estándar, coeficiente de variación, error total, sesgo;  Mientras que la literatura nos otorga la variabilidad biología intraindividuo e interindividuo del analito, para así poder evaluar estos datos y verificar si los valores que se están informando en el laboratorio son medicamente útil.

Objetivos

• Adquirir los conocimientos prácticos necesarios con respecto al control de calidad en laboratorio clínico.

• Analizar el comportamiento del control de suero y  realizar las medidas correctivas si se viola alguna regla de Westgard.
• Realizar correctamente una carta control
• Calcular el error total para el analito proteínas totales
• Verificar si nuestro error total es menor al descrito por la literatura
• Verificar si se cumple el criterio de Aspen en la medición realizada en nuestro laboratorio.
• Comprobar que los resultados entregados por el laboratorio son clínicamente útiles.

Materiales y métodos

• Analito: Proteínas totales
• Equipo Autoanalizado: Selectra

Serie: 12118

• Calibrador: Spintrol H CAL, Biuret colorimétrico: 5,24 g/dl

Lote:2475.C
Fecha exp: 2014-12

• Controles: Biorad Nivel I y Nivel II
• Reactivos: SPINREACT

Biuret. Colorimétrico

Lote: D203

Fecha exp: 2012-12

• Micropipetas
• Puntas Micropipetas
• Tubos Eppendorf

Método de biuret

• Reactivo de Biuret (Spinreact)

• Potasio de sodio tartrato 15 mmol/L
• Yoduro sódico 100 mmol/L
• Yoduro de potasio 5mmol/L
• Sulfato de cobre (II) 19 mmol/L

• Método colorimétrico de punto final
• Límite de detección: 0.20 g/L
• Límite de cuantificación: 1 g/L
• Linealidad: 15 g/L
• Reacción involucrada: El reactivo de color azul cambia a violeta en presencia de proteínas. Debido a la reacción entre los nitrógenos amínicos de los enlaces peptídicos proteicos y los iones cobres en una solución alcalina, formando enlaces de coordinación.[pic 1]

Resultados

1. Control de calidad interno

1. Las mediciones para el control de calidad interno se realizaron los días miércoles, viernes y sábados, a partir del 3 de abril del 2013, hasta alcanzar 20 datos, para así poder realizar un N20 para el nivel 1 (normal) y para el nivel 2 (patológico). Se confeccionaron gráficos de Levey Jennings con los parámetros estadísticos del fabricante (media, desviación estándar y coeficiente de variación), donde se evaluaron todos los datos aplicando las reglas de Westgard.

• Controles internos para realizar N20

Cartas control de Levey – Jennings

[pic 2]

[pic 3]

Día 1 al 10 Nivel 2: Hay un 10X bajo la media, no es un error pero si es una advertencia, ya que se está frente a una tendencia.

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