Cromosomas

OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS HUMANOS

INTRODUCCIÓN

Existen muchas soluciones que pueden ser empleadas solas o combinadas con otros colorantes y productos químicos, en cualquiera de los métodos especiales de tinción. Por su carácter químico se tienen colorantes ácidos, que son compuestos nitrofenólicos o con algún grupo carboxilo o sulfónico, y colorantes básicos, que por la presencia de algún grupo amino o alquilamino se combinan con los ácidos para formar sales.

BANDEO CROMOSÓMICO

La introducción de técnicas de bandeo no sólo ha hecho posible la identificación rigurosa de cromosomas individuales sino que también ha ofrecido una oportunidad de caracterizar e identificar la morfología subcromosómica. Cada técnica produce un bandeo característico, lo que depende de la metodología que se utilice. Caspersson y sus colaboradores (1969) fueron los primeros en informar un método de tinción diferencial para la obtención de una segmentación longitudinal de los cromosomas metafásicos. A partir de este momento se han desarrollado diferentes técnicas de bandeo:

- bandeo Q (bandas fluorescentes con quinacrina)

- bandeo C (bandas centroméricas)

- bandeo G (bandas con giemsa)

- bandeo R (bandas en reverso)

- bandeo N (bandas de las regiones organizadoras nucleolares -NOR-)

Los estudios de bandeo cromosómico han revelado que cerca del 17% al 20% del complemento cromosómico humano consiste de bandas-C, o heterocromatina constitutiva. Un alto porcentaje de esta heterocromatina es altamente polimórfica y consiste de diferentes familias de ADNs alfa satelitales con varias estructuras repetidas en un alto grado. Algunos cromosomas tienen duplicaciones complejas inter - e intracromosómicas, presentes en regiones pericentroméricas. El 80% restante del genoma, es decir el componente eucromático, se puede dividir en bandas- G, R y T. Se piensa que estas bandas citogenéticas difieren en su composición nucleotídica y en la densidad génica, aunque en el ámbito molecular, no ha sido posible determinar los límites precisos de las bandas. Las bandas-T en su mayoría son G+C y son ricas en genes, mientras que las bandas G son pobres en G+C. Según los últimos resultados publicados dentro del Genoma Humano (2001), la densidad de genes fue mayor en regiones de alto contenido de G+C que en regiones de bajo contenido de G+C, como se esperaba. Sin embargo, la correlación entre el contenido de G+C y la densidad génica no se enmarcó dentro de lo que se predijo. Se localizó una proporción más alta de genes en las regiones pobres en G+C de lo que se había esperado.

Los métodos originales de bandeo producían hasta 320 bandas en metafase en un set haploide de autosomas humanos, pero con las técnicas actuales de tinción se pueden obtener hasta 2.000 bandas. La elección del bandeo cromosómico ha permitido dar ubicación en última instancia a los distintos genes a lo largo de los cromosomas, así como también a puntos precisos de rotura asociados a fragilidad, translocaciones, deleciones, inversiones, y otras alteraciones cromosómicas encontradas tanto en tumores sólidos como en leucemias. El bandeo no solo ha permitido la identificación de todos los cromosomas humanos sino además la detección de un amplio espectro de aberraciones cromosómicas numéricas y estructurales y estudiar las relaciones evolutivas entre cromosomas de varias especies.

La relación exacta de las bandas con la estructura general del cromosoma no está bien comprendida. Pero sus patrones de bandeo parecen reflejar diferencias locales: 1) el tiempo de replicación del ADN durante el período de síntesis, 2) el contenido relativo de pares de bases GC versus AT, y 3) la longitud relativa de las secuencias repetidas de genes que los cromosomas contienen.

Para describir un sitio en particular en un cromosoma bandeado, primero se anota el número cromosómico, luego el brazo (p o q), luego el número de la región dentro de un brazo, y finalmente la banda específica dentro de esa región. Por ejemplo, 1p13, se refiere al cromosoma 1, brazo corto, región 1 y banda 3. El diagrama del cromosoma 1 bandeado se muestra en la figura 13.

Figura 13. Diagrama del cromosoma 1 bandeado. Las bandas oscuras son aquellas que muestran

fluorescencia con quinacrina o que se tiñen con Giemsa .

brazo región banda

(Tomado de: Yunis, 1976 en Mange y Mange, 1999)

TECNICAS DE TINCION DIFERENCIAL

BANDEO Q.- Técnica en la cual se utiliza quinacrina, produciéndose patrones fluorescentes y no fluorescentes en los cromosomas metafásicos que al ser observados con microscopio de fluorescencia, revelan un patrón característico para cada par cromosómico. Aunque el mecanismo involucrado en este bandeo no es aún claro, se acepta que las bandas fluorescentes se encuentran en regiones cromosómicas donde el ADN es rico en adenina y timina. Recientes

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