Cultivo De Yemas Y Meristemos, vía Organogénesis Directa. Establecimiento De Rosa Y Piña.

Cultivo de yemas y meristemos, vía organogénesis directa. Establecimiento de rosa y piña.

Karen Andrea Castellanos Contreras (1610626); Luz Francy Yañez (1610653)

INTRODUCCIÓN

La organogénesis es la formación de un primordio unipolar a partir de una yema con el subsecuente desarrollo de este en un brote vegetativo, existiendo siempre una conexión entre los nuevos brotes y el tejido paterno. Estos brotes vegetativos son posteriormente puestos a enraizar en otra etapa, vía formación de primordios de raíces y el subsecuente enraizamiento final. Los brotes pueden formarse directamente del explante (organogénesis directa) o indirectamente a partir de callos.

En contraste con la embriogénesis somática, en la vía organogénica para la formación de una planta completa, ya sea por la vía directa o indirecta, se requiere de una secuencia de medios de cultivo, ya que aquellos medios que favorecen el desarrollo de los brotes inhiben la formación de raíces y viceversa.

OBJETIVOS

• Dominar la etapa 1 o fase de establecimiento de rosas y piña, vía organogénesis directa mediante el cultivo de yemas y meristemos.

• Continuar teniendo habilidades en el cultivo de tejidos especialmente siembra del material vegetal

MATERIALES

Kit básico de laboratorio

Material vegetal: Tallos de rosa y yemas apicales y meristemos de piña.

Tijeras

Cuchillo

Soluciones desinfectantes

MÉTODOS

Fase preparativa

Se escogieron las yemas de rosa con un centímetro de tallo aproximadamente y se retiró la parte superior de la corona de piña hasta dejar sólo dos primordios foliares y el domo apical: se dio paso al protocolo de desinfección específico:

Protocolo de desinfección para yemas de rosa:

Protocolo para yemas de piña:

Fase de establecimiento

Se hizo la disección de las yemas y obtención de los meristemos cortando los laterales y colocándolos respectivamente en cada uno de los frascos con medio de cultivo respectivo (2 explantes por cada frasco,respecto a rosa; y en piña un explante por cada frasco con medio de cultivo); finalmente se dejaron en el cuarto de crecimiento con las condiciones ambientales óptimas para su crecimiento.

RESULTADOS

YEMAS AUXILIARES DE ROSA

Contaminación endógena Contaminación exógena Fenolización Crecimiento Observaciones

Semana

1 (7dias) 37,5% 50% 87,5% 31,25% Se observó crecimiento en una sola yema de los explantes sembrados; y una contaminación del medio de cultivo.

Semana 2 (14dias) 10% 20% 100% 70% Se observó crecimiento en los explantes, y contaminación por hongo en todo el medio. Foto 1.

Semana 3 (21dias) 10% 20% 100% 70% Crecimiento en las yemas con presencias de hojas. Foto 2.

Semana 4 (28 días) 12,5% 12,5% 100% 75% Se observó mayor cantidad de hojas y solo un frasco tuvo contaminación endo y exo.

Para las yemas de Rosas se pudo observar crecimiento desde la primera semana aunque fue mínima. Al transcurrir semanas se vieron frascos contaminados por levaduras y por hongos que fueron descartados para que no diseminara la contaminación a los otros frascos. Esta contaminación pudo haber sido por una mala desinfección o por el tiempo que se tuvo en los desinfectantes, o al momento de la siembra se hablo. También se obtuvo un gran porcentaje de Fenolización y es debido al corte realizado al tallo de la Rosa; en la cual se produce una oxidación por radicales libres, compuestos fenolicos. En los frascos que quedaron se pudo ver un crecimiento de las dos yemas y en algunos crecimientos de dos brotes con variedad de hojas en una sola yema.

PIÑA YEMAS

Contaminación endógena Contaminación exógena Fenolización Crecimiento Observaciones

Semana 1 (7dias) 0% 0% 75% 0% Coloración negra en los explantes de piña.

Semana 2 (14dias) 0% 0% 75% 0% Se observó lo mismo que en la semana anterior.

Semana 3 (21dias) 25% 0% 75% 25% Se observó crecimiento en una sola yema.

Semana 4 (28 dias) 0% 0% 66,66% 25% Se descartó un frasco. En la yema que hubo crecimiento se observó una hoja color verde. Foto 3.

PIÑA MERISTEMO

Contaminación endógena Contaminación exógena Fenolización Crecimiento |Observaciones

Semana 1 (7dias) 0% 0% 100% 25% Se observo coloración negra en los explantes de piña y un crecimiento en un meristemo.

Semana 2 (14dias) 0% 0% 100% 25% Se observo la misma Fenolización del explante.

Semana 3 (21dias) 0% 0% 100% 25% Se siguió observando el mismo crecimiento del meristemo. Foto 4.

Semana 4 (28 dias) 0% 0% 100% 25% Se siguió observando el mismo crecimiento del meristemo

Para piña en yemas más que todo se observo fue un gran porcentaje de Fenolización, se obtuvo crecimiento de una hoja en una sola yema durante las 4 semanas de cultivo in vitro. Hubo poca contaminación para este tipo de explante.

Para piña en meristemo, este explante es el más limpio y libre de contaminantes, y se obtuvo un 0% de contaminación endógena como exógena, también se puede decir que hubo muerte por desinfección tanto en yemas como meristemos por tal razón no hubo mayor crecimiento aunque se tiene que tener en cuenta que este tipo de explante es de difícil crecimiento.

DISCUSIONES

El tipo de explante a usarse en los procesos de cultivo de tejido vegetal depende de la especie con la que se esté trabajando. Explantes como los meristemos apicales y las yemas axilares son genéticamente muy estables, este tipo de explantes sirve para reproducir múltiples clones de una forma o variedad con características especiales que se desean mantener en el cultivo. Otros explantes como las yemas adventicias son más bien genéticamente inestables y producen un alto grado de variabilidad en los clones, este procedimiento no es útil para la producción de plántulas.

El cultivo de meristemos es un método efectivo para la eliminación de infecciones virales y es el material preferido para la conservación de germoplasma. La razón principal por la cual las células meristemáticas

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