Cultivo de orina y prueba de sensibilidad antimicrobiana

Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Químicas, Bioquímica y Farmacia.[pic 1]

Asignatura: Bacteriología clínica, Cuenca-Ecuador.

Nombre:

Ciclo: Sexto

Grupo: G2Sub2

Título: Cultivo de orina y prueba de sensibilidad antimicrobiana.

Objetivos:

• Aplicar el conocimiento, conceptos y fundamentos sobre la identificación bacteriana por medio de pruebas bioquímicas.
• Analizar las diferentes resistencias microbianas a través pruebas de sensibilidad a antimicrobianos.

Marco teórico:

Urocultivo

Es un antibiograma para identificar microorganismos causantes de infección en vías urinarias. Se complementa con una prueba de sensibilidad a antibióticos para determinar que medicamentos se puede administrar al paciente.

La recolección tiene que ser la primera orina del día, tomando las siguientes medidas:

• Limpiar la zona intima con agua y jabón.
• Desechar el primer chorro de orina.
• Tomar el chorro intermedio.

La muestra tiene que ser recolectada en el laboratorio o ser transportada únicamente hasta 2 horas desde la toma de muestra. A partir de ahí se encarga el laboratorio, y se cultiva en medios que favorezca el crecimiento de patógenos en orina como agar citrato o urea. A partir de las 24 a 48 horas se puede observar el crecimiento.

La interpretación de un urocultivo es positivo a una infección si tiene más de 100.000 unidades formadoras de colonias por mililitro (CFU/mL), cuando se usa un catéter que minimiza la contaminación se puede interpretar positiva con un valor entre los 1.000 y 100.000 CFU/mL.

Agar Sangre        

Este medio de cultivo es utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos. Al ser suplementado con sangre de un mamífero, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis (Castillo, M. C., Córdova, G. L., Ganoza, E. M., García, M. O., Velásquez, M. L., & Sarabia, J. C. 2007).

El medio contiene, peptona de caseína y extracto de levadura que proveen nitrógeno, carbono, aminoácidos y vitaminas. La peptona es la fuente de nitrógeno para la sangre. El equilibrio osmótico se mantiene gracias a la concentración de cloruro de sodio y el agar utilizado como agente solidificante. Está complementado con sangre de mamífero desfibrilada al 5% (Castillo, M. C., Córdova, G. L., Ganoza, E. M., García, M. O., Velásquez, M. L., & Sarabia, J. C. 2007).

Existen tres tipos de hemólisis:

• Hemólisis alfa en la cual las colonias se ven rodeadas por una zona de decoloración verdosa producida por la formación de biliverdina.
• Hemólisis beta se da cuando la colonia se rodea por una zona clara
• Hemólisis gamma no se observan cambios en el medio que rodea la colonia (Aladdin-e, 2013).

Agar Brolacin        

Este medio es utilizado en el laboratorio, sobre todo en la bacteriología urinaria general, para aislar y contar las bacterias que se encuentran presentes en una muestra de orina. Favorece el crecimiento de patógenos y contaminantes urinarios, aunque, debido a la ausencia de electrolitos, impide la indebida proliferación de especies de Proteus (un género de bacterias gramnegativas) (BD Company, 2012).

La lactosa presente en el medio proporciona una fuente de energía para los microorganismos capaces de utilizarla a través de la fermentación.  La cistina permite el crecimiento de colonias enanas de coliformes (grupo de especies bacterianas). Se reducen las fuentes de electrolitos para minimizar la proliferación de las especies de Proteus. Así, este medio permite la determinación cuantitativa de distintos patógenos urinarios (BD Company, 2012).

Agar Manitol Salado        

Se trata de un medio altamente selectivo por la alta concentración salina y diferencial debido a la alta capacidad de fermentación del manitol por los microorganismos. Se utiliza para el crecimiento de bacterias Grampositivas mientras inhibe el crecimiento de Gram-negativas. Este medio de cultivo es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos (Laboratorios Britania, sf).

Este medio de cultivo está compuesto por extracto de carne, peptona de carne y tripteína para la fuente de carbono, nitrógeno y vitaminas. Este medio puede ser fermentable y tiene un indicador de pH que es el rojo fenómeno. Cuando las bacterias fermentan en el manitol cambia el pH tendiendo a ser más ácido y el indicador cambia de rojo a amarillo. (Jordá, Marucci, Guida, Pires & Manfredi, 2012).

• Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de un halo amarillo.
• Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del medio, rojas rodeadas o no de halo rojizo-púrpura.

Agar Mueller Hinton        

Es empleado para las pruebas de susceptibilidad por difusión en disco antimicrobiano de bacterias comunes de rápido crecimiento mediante el método Bauer-Kirby. Este metodo fue estandarizado por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) despues un estudio que confirmaba los beneficios de este procedimiento ya que es reproducible, con fórmula simple y la gran cantidad de datos que se obtienen por este método. (Power, & Johnson, 2009).

Segun el CLSI  este procedimiento es recomendado para patogenos bacterianos aerobios o anaerobios facultativos de rapido crecimiento.

Medio de cultivo Kligler Iron Agar

Es útil para identificar enterobacterias bacilos gramnegativo en base a la fermentación de azúcares y formación de ácido sulfúrico. Este medio semilíquido tiene un agente solidificante que  es el agar, los compuestos que aportan nutrientes y permiten el desarrollo bacteriano son la peptona de carne y la tripteína; los carbohidratos fermentables son la glucosa y lactosa, la presencia de tiosulfato permite la producción de ácido sulfhidrico, cuando este ácido se combina, iones provenientes de citrato de hierro y amonio van a producir sulfuro de hierro (color negro). También se encuentra en su composición un indicador de pH que es el fenol rojo, cuando ocurre la fermentación de azúcares se producen ácidos que dan una coloración amarilla en el cultivo y una coloración rosa si el medio es básico.

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