ENSAYO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA

ENSAYO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA

KEVIN SANTIAGO VARGAS LEAL

INGENIRIA AGROINDUSTRIAL

FACULTAD DE AGRONOMIA

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA

2021

INTRODUCCION

Las enzimas son moléculas que se encargan de catalizar las reacciones químicas en los seres vivos, donde permiten la aceleración de la velocidad en la reacción. Son proteínas comúnmente, y la sustancia sobre la cual tiene presencia la enzima se conoce como sustrato; en la mayoría de procesos que se realizan en la célula se necesitan enzimas para su desarrollo. Sabemos que la enzima cuenta con una región en su estructura que se denomina ‘’Sitio Activo’’, y en este es donde se permite la unión de uno o más sustratos. Conoceremos cómo reacciona la enzima de la catalasa que podemos encontrar en las células de los vegetales (tomate y papa) y en los tejidos de animales (hígado),  por medio de un laboratorio someteremos la catalasa a un proceso para evidenciar la liberación de moléculas de oxígeno y lograr evidenciar a que cambios se somete en su aspecto físico, también cómo influirá la temperatura en la velocidad de reacción y ante los diferentes compuestos que serán mezclados. Se evaluara otra enzima, llamada amilasa, la cual se encuentra en nuestras glándulas salivales y esta se emplea en la digestión de almidones.

ACTIVIDAD ENZIMATICA EN LA CATALASA Y AMILASA

Las enzimas son proteínas grandes que permiten una mayor velocidad en las reacciones químicas, y tendremos una actividad dedicada al estudio de cómo se desarrolla las reacciones en la enzima de catalasa y amilasa por medio de un laboratorio. La catalasa es una enzima que hace parte de las antioxidantes, se encuentra en la mayoría de organismos aerobios. Esta enzima permitir la aceleración en  la descomposición del peróxido de hidrogeno (H2O2 ), compuesto toxico resultante de los procesos del metabolismo celular. Dependiendo de su cantidad de pH, la catalasa disminuirá o aumentara su actividad, en la cantidad de pH donde la enzima presentara su máxima actividad catalizadora se denomina pH óptimo, y en la temperatura donde la catalasa este con su mayor actividad se conoce como temperatura óptima.

Mediante un laboratorio podremos darnos cuenta cómo influye la actividad de la catalasa, donde utilizaremos papa, hígado, agua oxigenada (sustrato), lugol, hidróxido de sodio al 1% , ácido clorhídrico al 1% y solución de almidón. La papa y el hígado fueron sometidos en diferentes porciones: una donde se extrae su concentración en forma de papilla y el hígado en forma similar, la otra forma fueron en pedacitos cortados de la papa e hígado en forma de cuadritos. Las muestras se evaluaron con la adicción de 1ml de sustrato (Agua oxigenada) y se pueden evidenciar los cambios en las muestras, al presentarse burbujas como resultado a la liberación de oxigeno tanto en la papa como en el hígado, aunque la reacción se hizo más evidente en el hígado macerado. Agregamos en dos tubos de ensayo hígados en forma de cuadritos y se les adiciono 1ml NaOH (Hidróxido de sodio al 1%), al otro tubo se le agrego 1ml de HCl (Ácido clorhídrico al 1%), de esta manera pudimos observar cambios en su reacción, su coloración se hizo muy distinta; Evaluaremos la actividad de la enzima adicionan 1ml de agua oxigenada, con este paso pudimos ver cómo reaccionan en las diferentes muestras, ante el ácido fue como una neutralización a la función de la enzima, en la base se produjo la reacción y se evidencio un poco más de burbujeo y en la muestra de hígado inicial presento la misma reacción en liberación de oxigeno (burbujas) demostrando su reutilización. Después sometemos una muestra de hígado en cuadritos a un baño de maría (Calor) a una temperatura de 90°C durante 10min, al verlo se ve que sufrió cambios físicos y en su actividad, se agrega agua oxigenada y no presenta alguna reacción diferente, con esto podemos inferir que la enzima se encuentra desnaturalizada y deja de cumplir su función ya que la temperatura supera su temperatura óptima.

La amilasa es una enzima que tiene la función de catalizar reacciones producidas por la hidrolisis, digiere el glucógeno y el almidón para formar algunos fragmentos de glucosa libre y glucosa. Esta se encuentra presente en nuestras glándulas salivales y páncreas. Realizaremos una evaluación a la actividad de la amilasa y utilizaremos 1ml de su sustrato (Almidón) y agregamos también 1ml de almidón a un tubo que contiene saliva, esperamos 25 minutos…, al haber pasado el tiempo ya, adicionamos 4 gotas lugol y agitamos para poder detectar la presencia del almidón. Es de tener en cuenta que las reacciones de lugol son positivas si su coloración se torna oscura y al tornarse de color más clara, es negativa. Al tener ya el resultado, nos damos cuenta de que el almidón reacciono de manera positiva y en la muestra de amilasa se presenta de manera negativa, la amilasa se encarga de actuar sobre el almidón digiriéndolo y causando rompimiento en sus enlaces.

LABORATORIO EN CASA

Podremos evaluar los diferentes efectos del pH y como la temperatura influye sobre la actividad de las enzimas. Utilizaremos los siguientes elementos: Recipientes de vidrio, agitador, isodine solución, agua, vinagre blanco (Ácido acético), fécula de maíz, agua oxigenada, jeringa de 10ml y 1 tapa de gaseosa. Empezamos preparando  la fécula de maíz en 50ml de agua. Se sacaran 2 muestras; en un recipiente tendremos 1ra muestra con saliva agregándole 1ml de fécula de maíz y en otro recipiente se tendrá la 2da muestra con solo 1 ml de fécula de maíz, continuamente pasaremos agregando 4 gotas de isodine a cada muestra y estaremos atentos al resultado. En la 1ra muestra que contiene saliva + fécula podemos ver que tiene una coloración un poco más clara y presenta un mínimo burbujeo, mientras que en la 2da muestra donde solo tenemos la fécula, simplemente acoge un color oscuro intenso.

Evaluaremos el comportamiento de la temperatura en la catalasa, junto al comportamiento que presenta esta enzima frente al ácido acético. Utilizaremos hígado en 3 diferentes recipientes, donde serán: 1ra hígado a cuadros en el recipiente, 2da hígado en cuadritos + ácido acético, 3ra hígado + agua, baño de maría (prueba de calor) durante 10 minutos y analizaremos los resultados de su actividad al agregarle agua oxigenada. En la 1ra muestra su reacción es muy intensa y es el que mayor oxigeno libera, ya que presenta un burbujeo rápido. En la 2da muestra presenta un burbujeo más diminuto y un cambio de color inmediato, mientras que en la 3ra muestra donde fue sometida a una alta temperatura, se evidencia que la enzima fue desnaturalizada y no cumplirá su actividad catalítica.

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