Electroforesis en gel de agarosa Ingeniería en biotecnología

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UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE PUEBLA 

Reporte de Práctica: Electroforesis en gel de agarosa

Ingeniería en biotecnología

Materia: Ingeniería genética

María del Transito Borraz Argüello

Alumno: Braulio Durán Oliver

Grupo: 6 BA

Septiembre – diciembre 2021

INTRODUCCIÓN

La electroforesis en gel es una técnica muy utilizada para separar moléculas o fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos. Los materiales más comunes para separar moléculas de ácidos nucleicos son polímeros como la poliacrilamida o la agarosa. Estos geles se colocan en la cubeta de electroforesis, sumergidos en un tampón de pH alrededor de 8. De esta forma, las moléculas de DNA o RNA sometidas a electroforesis se desplazarán al polo positivo ya que a pH superiores a poseen cargas negativas. Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de DNA de diferente tamaño, van a emigrar de forma distinta en un gel de electroforesis. La distancia recorrida por cada fragmento de DNA va a ser inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. Es importante la utilización de marcadores de tamaño conocido porque nos permitirán calcular los pesos moleculares de las muestras de DNA problema.

La electroforesis en gel de agarosa es de las más utilizadas para analizar y caracterizar ácidos nucleicos de distintas procedencias. Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de DNA de diferente tamaño van a emigrar de forma distinta en una electroforesis en gel de agarosa. Además, si en dicha electroforesis se aplican marcadores de peso molecular (fragmentos de DNA de tamaño conocido) se puede calcular el tamaño aproximado del DNA en estudio.

En el caso de los geles de agarosa, se le añade bromuro de etidio, sustancia que se intercala entre las bases del DNA y es fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta. Tras la electroforesis, se visualiza el gel con una lámpara de luz UV, y se verán las bandas correspondientes a las muestras de DNA aplicado y los marcadores de peso molecular. (Carmen Alicia Padilla Peña, s.f.)  

OBJETIVOS  

Realizar el procedimiento adecuado de la elaboración del gel de agarosa, siguiendo las medidas adecuadas para el correcto manejo de los reactivos.

Analizar el procedimiento para la toma de muestras y la colocación de estas en el gel de agarosa.

Observar los patrones que pudieran presentarse al terminar la electroforesis.

METODOLOGÍA

1. Preparación del amortiguador TAE (180 ml de agua destilada + 20 ml de amortiguador TAE).

Figura 1: Preparación de amortiguador TAE

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1. Preparación del gel de agarosa al 0.8% (m/v) con amortiguador TAE: se calentó la agarosa y se mezcló con 5 μl de bromuro de etidio  

Figura 2: Preparación del gel de agarosa

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1. Se vertió el gel de agarosa en el soporte y se colocó el peine con el número de pozos para el total de muestras que se va a colocar en el gel.  

Figura 3: Vertido del gel de agarosa                                Figura 4: Gel de agarosa con peine de pozos.

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1. Se dejo gelificar por 15 minutos para después retirar el peine, se colocó el gel de agarosa en la cámara de electroforesis y se le vertió el , los pozos se colocan del lado negativo de la corriente.

Figura 5: Agarosa gelificada (el peine se ha retirado).                   Figura 6: Vertido del amortiguador[pic 6][pic 7]

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