ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

ELECTROFORESIS EN AGAROSA

MARIA ALEJANDRA MONTOYA ARANGO

 Profesor: Jaime de Jesús Calle

Biología celular

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA

MAYO 5/2020

MEDELLÍN

Electroforesis en gel

Es una técnica comúnmente utilizada para separar fragmentos de ADN y ARN por su tamaño y carga; esta consiste en aplicar una corriente a través de un gel que contiene las moléculas de interés. Con base en su tamaño y carga, las moléculas se desplazarán por el gel en diferentes direcciones o a distintas velocidades, con lo que se separan unas de otras. Ya que todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa la electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN solo por su tamaño. (Academy n.d.)

Electroforesis de ADN en gel de agarosa

Ésta técnica se basa en el hecho de que el ADN se encuentra cargado negativamente debido a los grupos fosfato, esto tiene como consecuencia que cuando se aplique el campo eléctrico, el ADN se desplazara del lado negativo al lado positivo; (Pérez de Castro 2010) para tal separación se utiliza un gel (bloque de material similar a la gelatina)  que en este caso está hecho de un polisacárido llamado agarosa, ésta se consigue como hojuelas secas pulverizadas. Cuando la agarosa se calienta en una solución amortiguadora (agua mezclada con algunas sales) y se deja enfriar, forma un gel sólido ligeramente blando, ya que La agarosa es un polímero lineal compuesto de residuos alternantes cuyas cadenas forman hebras helicoidales, que al pasar a estado sólido forma una malla tridimensional de canales con diámetros entre 50 y 200 nm, A nivel molecular, el gel es una matriz de moléculas de agarosa que se mantienen unidas por puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros.  (Fierro n.d.) los fragmentos más grandes atravesaran menor parte del gel de agarosa, por lo tanto quedaran más cerca del lado positivo, mientras que los fragmentos más pequeños tendrán la posibilidad de pasar por más poros e ir más lejos, acercándose más al lado negativo.

Paso a paso para realizar la electroforesis en gel de agarosa.

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Imagen 1. Pasos iniciales para realizar la electroforesis en gel de agarosa. (Company 1989)

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Imagen 2. Pasos finales para realizar la electroforesis en gel de agarosa. (Company 1989)

Como se ilustró anteriormente para realizar la electroforesis debemos primero obtener el gel de agarosa quien hará posible la separación del ADN por tamaños, así:

1. MEZCLAR el polvo de agarosa una solución tampón TBE (Compuesto por Tris Base, ácido bórico y EDTA) en un matraz que soporte el ser calentado.
2. CALENTAR la solución hasta que hierva.
3. DEJAR ENFRIAR la agarosa hasta 60°C agitando con cuidado el matraz para permitir un desvanecimiento uniforme del calor.
4. SITUAR el molde (peine) en la ranura.
5. VERTIR la solución de agarosa previamente enfriada en un porta geles que servirá como molde para éste.
6. ESPERAR aproximadamente 20 minutos para que el gel se solidifique.
7. RETIRAR el peine con cuidado para dejar los agujeros o pocillos libres.
8. METER el gel preparado en la cubeta de electroforesis.
9. Cubrir el gel con una solución tampón TBE.
10. DEPOSITAR las muestras en los pocillos de la siguiente manera:

• Dejar el primer pocillo para el marcador de peso molecular; quien contiene fragmentos de ADN de longitudes conocidas.
• En los demás se depositan las muestras a valorar. 

[pic 3]

Imagen 3: manera de situar las muestras en el gel de agarosa.(Academy n.d.)

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