GRAVIMETRIA y volumetria.

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LABORATORIO MICROBIOLOGÍA

ANÁLISIS MICROBIOLOGICO DE  AGUA

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INTRODUCCIÓN

Según Olembo (1991), Los microorganismos son los seres más numerosos que existen en la tierra, su presencia y actividad es esencial para la salud y funcionamiento adecuado de todos los ecosistemas. Existen microorganismos que degradan la materia orgánica haciéndola nuevamente disponible para las plantas, otros han jugado un papel significativo en relación con el hombre y su productividad, participando en la agricultura y en la elaboración de alimentos y medicinas. Esa capacidad de desarrollar innumerables funciones se debe a su gran versatilidad bioquímica (Portugal & Goméz, 1998)

La contaminación de origen fecal puede ser evaluada mediante la determinación de coliformes termotolerantes o mediante la presencia de E. coli. En los valores guía para la calidad bacteriológica del agua de bebida (OMS, 1995), ambas determinaciones se consideran como alternativas aceptables y su presencia indica contaminación de origen fecal.  Hasta hace pocos años, se consideraba a los coliformes totales como indicadores de contaminación del agua. Sin embargo, se ha demostrado que solamente algunas de las especies que conforman este grupo son de origen fecal mientras que otras pueden estar presentes en forma natural en diferentes ambientes acuáticos. Actualmente, los coliformes totales se emplean para evaluar la calidad del agua (Allen, 1996) y el grupo de bacterias coliformes termotolerantes, para evaluar la calidad sanitaria del agua, calidad que está relacionada con la transmisión de patógenos. Las bacterias coliformes totales se detectan con los métodos de membrana de filtración y tubos múltiples, con medios específicos, y se incuban a 35-37 °C hasta 48 horas. Los coliformes termotolerantes son detectados con métodos similares pero con medios específicos y una incubación a 44,5 °C. (Aurazo, 2004).

OBJETIVOS

• General:

Determinar la calidad microbiológica de muestras de agua potable de la ciudad de Barranquilla.

• Específicos

Establecer los factores que influyen en la presencia de poblaciones microbianas

Reconocer las técnicas de Muestreo de agua para identificar microorganismos

Realizar diferentes técnicas de tinción, para la identificación de microorganismos  presentes en las muestras de agua extraídas de las zonas de estudio.

METODOLOGÍA

Materiales y Reactivos

Agar Sabouraud

Agar Plate count

Cajas de Petri

Colorantes tinción de Gram

Azul de lactofenol

Balanza

Pesa sustancias

Colorantes de GRAM: Cristal violeta, fucsina, lugol, alcohol acetona

Aceite de inmersión

Microscopio

Incubadora a 30°C

Baño serológico

Agua destilada.

Asa bacteriológica.

Soporte para coloraciones.

Filtros

Equipo Millipore para filtración (matraz, soporte, embudo, pinzas) estéril

Mecheros

Gradillas

Etanol (96°) para flamear pinzas

Material que deben tener los estudiantes:

Muestra de agua potable (agua de filtro, sistema Biozone, purificadora (rellenadora), agua de charco, alberca, pozo subterráneo)

Pinzas de punta roma

Tapabocas

Bata blanca

Zapatos cerrados

Cofia o gorro desechable, gafas de seguridad

Portaobjetos

Cubreobjetos

Antes de iniciar la práctica de Laboratorio, es necesario que se conozcan las siguientes Normas:

1.  NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Conviene tener muy en cuenta que una buena práctica de laboratorio es condición indispensable la seguridad y el excelente desarrollo de todos los procedimientos que se realicen allí.

A continuación se enumeran las principales normas de seguridad que se deben cumplir en el laboratorio para evitar accidentes.

1. Ubicar los extintores, duchas de emergencia, kit para derrames.

2. Usar siempre implementos de seguridad: bata, guantes y si el profesor lo exige para determinada práctica: gafas de seguridad y máscara contra vapores y gases ácidos.

3. Durante operaciones de manejo de solventes de bajo punto de ebullición y/o inflamables, no se pueden tener encendidas llamas abiertas. (Etil éter, éter de petróleo, acetona, etanol). Por la misma razón no se permite fumar en el laboratorio ni en zonas aledañas al mismo.

4. Considerar todos los químicos orgánicos peligrosos para la salud, evitar exponerse a ellos. Leer las precauciones de seguridad de cada compuesto antes de cada sesión de laboratorio y usar guantes protectores y de ser posible, manéjelos bajo una cabina extractora.

5. Cuando caliente sustancias en tubos de ensayo, dirija siempre la boca del mismo hacia un lugar donde no se encuentra ninguna persona

6. Si sus manos entran en contacto con algún químico, lávelas con abundante agua y jabón. Excepto en el caso de soluciones básicas se debe lavar únicamente con agua.

7. Disponer los químicos en los contenedores apropiados y de la forma indicada por el profesor. Nunca disponer los líquidos directamente en el drenaje, ni los sólidos conjuntamente con los desechos corrientes.

8. No se permite pipetear con la boca, para ello se hace necesario el empleo de dispositivos adecuados.

9. No se permite comer, beber, fumar, guardar alimentos, ni aplicar cosméticos.

10. Evitar el uso de joyas durante el trabajo

11. Habrá que mantener el laboratorio limpio y aseado, retirando del mismo cualquier material que no tenga relación con el trabajo.

12. Las superficies de trabajo se descontaminaran permanentemente y en caso de derrames de sustancias potencialmente peligrosas.

13. Es necesario lavarse las manos antes de iniciar los procedimientos y una vez finalice la práctica.

14. Todos los procedimientos técnicos se practicaran de manera que se evite en lo posible la formación de aerosoles.

15. Todos los líquidos o sólidos contaminados se descontaminaran antes de eliminarlos o de volver a utilizarlos; los materiales contaminados que se vayan a esterilizar en autoclave o incinerar fuera del laboratorio deberán introducirse en recipientes resistentes e impermeables, que se cerrarán antes de sacarlos del laboratorio, debidamente identificados.

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