Guia De Laboratorio Factores Que Afectan La Enzima Catalasa

UNIVERSIDAD EL BOSQUE

FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

Programa de Bioingeniería

Laboratorio De Bioquímica Docentes: Vilma Teresa Pinzón Fajardo

BCTBE

Graciela Juez Castillo, MSc.

Factores que afectan la actividad de las enzimas

Factores que afectan la actividad de las enzimas

1. Introducción

Las enzimas, con excepción de las ribozimas, son proteínas que actúan como catalizadores de las reacciones bioquímicas en todos los seres vivos. Una de las formas de observar experimentalmente la actividad enzimática es mediante la identificación y cuantificación de los productos formados en las reacciones que regulan. La acción de estos polipéptidos en una reacción se ve afectada por factores físicos y químicos tales como la temperatura, la concentración de la enzima y del sustrato, el pH, la presencia de inhibidores, la presencia de coenzimas y cofactores entre otros.

El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y debido a su toxicidad, ocasionada por su gran poder oxidante, debe transformarse rápidamente en compuestos menos nocivos. Para ello las células utilizan la catalasa que descompone el H2O2 en agua y oxígeno.

2 H2O2(l) 2H2O(l) + O2(g)

Peroxidasa o Catalasa

La cantidad de O2(g) y en consecuencia la de burbujas es directamente proporcional a la velocidad de reacción y se puede utilizar como una medida de esta última.

En esta práctica de laboratorio se hacen ensayos para verificar la actividad de la enzima y compararla con la de un catalizador inorgánico (MnO2). Igualmente se apreciará cualitativamente el efecto del pH, la temperatura y el origen de la enzima sobre la velocidad de la enzima catalasa, esta enzima puede actuar como una peroxidasa.

2. Objetivos

Los estudiantes mediante ensayos sencillos

2.1. Reconocerán y compararán la actividad de la enzima catalasa, presente en tejidos animales y vegetales.

2.2. Compararán la acción de la catalasa como catalizador orgánico con la del MnO2, catalizador inorgánico, sobre el mismo sustrato peróxido de hidrógeno o agua oxigenada.

2.3. Observarán el efecto de la temperatura en la velocidad de la reacción.

2.4. Observarán el efecto del pH sobre la velocidad de la reacción.

3. Tareas de Aprendizaje

3.1. Para el preinforme

Los estudiantes harán un resumen y lo consignaran en el cuaderno de laboratorio, sobre los siguientes conceptos o temas.

3.1.1. Tipo de organismos, según sean anaerobios o aerobios, en los que se encuentra la catalasa y función de la enzima en ellos.

3.1.2. Cofactores o coenzimas de la catalasa (si los requiere).

3.1.3. Temperatura óptima y pH óptimo de la catalasa.

3.1.4. Factores que afectan la actividad enzimática.

3.1.5. Inhibidores de la catalasa y ¿cómo actúan?.

3.1.6. Mencione algunos métodos utilizados para medir la actividad enzimática de la catalasa.

3.2. Para el Informe

Los estudiantes para el informe realizaran:

3.2.1. Análisis de cada resultado obtenido y comparación de resultados entre tejido animal y tejido vegetal.

3.2.2. Según los resultados analice en que condiciones de pH y temperatura, se observa que la reacción inicia en menor tiempo.

3.2.3. Análisis del siguiente artículo científico. Boveris, A., Stoppani, A. “Metabolismo del Peróxido de Hidrógeno en Trypanosoma cruzi”. Ubicar URL en bibiliografía. Responda las siguientes preguntas:

3.2.3.1. Mencione los intermediarios glucolíticos, del ciclo del ácido tricarboxílico y sustratos de enzimas, que se encuentren asociados a la producción de H2O2 en el artículo.

3.2.3.2. Expliqué, ¿por qué la adición de NADPH y NADH aumentó la concentración de H2O2?.

3.2.3.3. Expliqué, ¿por qué se considera que un aumento intracelular de H2O2 en Trypanosoma cruci puede ser letal?.

3.2.3.4. Mencione la enzima y el estado de desarrollo de Trypanosoma cruci en el cual se basa el estudio para medir las concentraciones de H2O2.

3.2.3.5. Deduzca una conclusión de la tabla Nº 1 (pag 260).

4. Materiales por grupo de trabajo

4.1. Material de ensayo para todo el grupo: los estudiantes deben llevar el siguiente material el día de la práctica (Solo las cantidades solicitadas)

Material biológico Cantidad

Espinaca 50g

Hígado de res 50g

Papa criolla 50g

Champiñones 50g

4.2. Material por grupo de trabajo

4.2. Material por grupo de trabajo

Material Cantidad

Tubos de ensayo 10

Gradilla 1

Pipeteador 1

Pipetas Pasteur 2

Pinzas para tubo de ensayo 1

Pipetas graduadas de 5 ml 1

Pipetas graduadas de 1 ml 1

Soporte universal 1

Aro con nuez 1

Placa refractaria de calentamiento 1

Vasos de precipitados de 400 ml (1) 2

Vasos de precipitados de 250 ml 1

Vasos de precipitados de 100 ml 1

...