Hidrólisis del almidón por Amilasa

PRACTICA No. 2

Hidrolisis del Almidón por Amilasa[pic 1]

Departamento de Bioquímica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala, Carrera de Química Farmacéutica.

INTRODUCCION

El almidón es una sustancia utilizada como almacenamiento de carbohidratos formada por amilosa y amilopectina (alto peso molecular),  la digestión del mismo implica la hidrolisis de enlaces α- glicosídicos para formar sus monosacáridos (Smith, Jr.; p.742). En la naturaleza abundan las enzimas capaces de hidrolizar almidones, en el hombre las enzimas que realizan este proceso son las amilasas (salivares y del tracto digestivo), estos transforman el almidón en maltosa, glucosa y dextrinas (Geissman, T; p. 570), al romper los enlaces glucosídicos α (1,4).

La hidrólisis del almidón es importante puesto que este al ser una reserva de carbohidratos también será una reserva importante de energía para realizar trabajo; el método de Somogyi y Nelson permite determinar la concentración de azucares reductores producidos por la hidrólisis (Urzagasti, H., et al; p.1). El objetivo de la práctica es conocer el efecto de la amilasa sobre el almidón y determinar la cantidad de azúcares reductores liberados por la acción enzimática. Al finalizar la práctica se espera poder desarrollar y reproducir una metodología para la determinación de azúcares reductores.

METODOLOGÍA

Se realizó la hidrólisis de almidón de una solución al 1%, esta se produjo mediante la enzima amilasa que existe en dos formas: la α-amilasa y β-amilasa; la α-amilasa cataliza la hidrólisis de uniones α-1,4-glucosídicas de polisacáridos como el almidón en donde ataca las cadenas tanto de amilasa como de amilopectina para formar así unidades de glucosa, maltosa y dextrinas (MacFaddin, J.; p.388). A la solución de almidón con amilasa se le examinó  tomando varias alícuotas para poder conocer la actividad de la amilasa sobre el almidón a lo largo del tiempo, y poder asi calcular la cantidad de enlaces α (1,4) rotos por la enzima.

Luego de la hidrólisis se realizó la prueba de Somogyi y Nelson para poder cuantificar la cantidad de azucares reductores obtenidos de la misma, estos azucares al agregar el reactivo de Somogyi producen un precipitado de cobre reducido en forma de hidrato cuproso y oxido cuproso que se identifica con una coloración roja-amarilla a pH 9  y en medio ácido se oxida el arsenato y molibdato del reactivo de Nelson dando así origen a la formación de azul de molibdeno (Urzagasti, H., et al; p.2), el color permanecerá estable por 24-36 horas y podrá ser medido en espectrofotómetro a 630nm para obtener la concentración.

RESULTADOS

Tabla No.1 Curva calibración

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el laboratorio de bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la tabla 1 se muestran las concentraciones de glucosa en mg/L y mol/L, a esta se le realizo la prueba del método de Somogyi- Nelson en donde a mayor concentración se observa una mayor absorbancia debido a que hay mayor concentración de azucares reductores.

Tabla No. 2 Muestra problema

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el laboratorio de bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la tabla 2 se muestran las concentraciones de glucosa obtenidas luego de la hidrólisis enzimática con la enzima amilasa, a mayor tiempo de acción se obtuvo mayor concentración de glucosa como producto de esta hidrólisis. Y por tanto también se obtuvo mayor cantidad de azucares reductores liberados.

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