INFORME AMILA SALIVAL PRACTICO

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INDICE

                   CONTENIDO                                                 PÁGINA

• Resumen                                                3                                                

• Introducción                                         4

• Objetivos                                                 4

• Materiales                                                 5

• Método experimental                                 6

• Cálculos                                                 9

• Resultados                                                 12

• Discusión                                                 16

• Conclusión                                                 17

• Cuestionario                                         18

• Anexos

• Bibliografía

RESUMEN

El práctico trata de actividad enzimática, por lo tanto debemos saber que las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran las reacciones metabólicas, ya sea intracelular como extracelular. Tienen acciones tanto físicas como químicas, y pueden verse afectadas por condiciones del lugar de acción de éstas.  

Por medio de dos experimentos, verificaremos cómo actúan, por lo cual se utilizará saliva diluida a diferentes temperaturas y se mezclara con distintos compuestos como una solución neutra de almidón al 2% y Lugol; para poder observar la actividad enzimática de la amilasa y eso se comprobara mediante la cantidad de concentración de almidón que posea en los diferentes experimentos, que se detallaran más adelante.

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas que ocurren tanto a nivel celular como fuera de ellas, sin sufrir cambio en su estructura y/o su función. La acción de las enzimas por sus características físico-químicas puede verse afectado por las condiciones presentes en el lugar de acción de estas tales como la Temperatura, PH,  inductores e inhibidores, entre otros factores.

La enzima en observación es la α-amilasa, que es una enzima proteica presente en la saliva humana, la cual tiene la función de degradar el almidón, que es un polisacárido de reservas en las plantas y está compuesto por amilosa y amilipectina.

Durante el desarrollo de éste práctico se trabajará con tubos de ensayo los cuales debemos enumerar, posteriormente procederemos a agregar una solución de 3 ml de almidón y 1 ml de saliva   a cada tubo, los cuales dejaremos  reposar a una temperatura determinada, todo esto con el objeto de determinar la concentración final de almidón en cada tubo de ensayo luego de la lectura de absorbancia en el espectrofotómetro.

OBJETIVO

• Determinar las concentraciones de almidón en los diferentes experimentos a realizar.

MATERIALES

• 1 Gradilla.
• 10 tubos de ensayo.
• 2 Micropipetas (200 y 1000 µl)
• 3 vasos de precipitado ( 50 o 100ml)
• Baño de Hielo (0°C).
• Baño termorregulador (90°C).
• Estufa a 37°C
• Cubetas para espectrofotometría
• Espectrofotómetro

Soluciones y reactivos:

•        Solución de almidón al 2%

•        Lugol

•        Solución salina fisiológica (0,9%).

•        Agua destilada.

•        Saliva humana.

METODO EXPERIMENTAL

        Un voluntario debe juntar aproximadamente 5 ml de saliva en un vaso de precipitado pequeño y diluirla con solución salina fisiológica hasta obtener 15 ml de “solución enzimática”.

Con los datos de la tabla siguiente se realizó la dilución del sustrato, lecturas de absorbancia y luego construir la curva de calibración para el complejo yodo-almidón

Experimento 1: Determinación de la Actividad Enzimática

En 2 tubos de ensayo agregamos 3 ml de solución neutra de almidón 2 % (p/v), luego colocados en baño térmico a 37°C durante por lo menos 2 min.

Manteniendo los tubos con el almidón (sustrato) a 37°C agregamos 1 ml de la saliva diluida (enzima) al primer tubo y 1 ml de suero fisiológico al segundo tubo; mezclar suavemente e incubar por 10 min a 37°C.

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