INFORME DE LABORATORIO Nº 2. APLICACION DE LAS TECNICAS DE IGARASHI, ENFRENTAMIENTO DUAL Y GAUZE PARA INTERACCIONES MICROBIANAS

[pic 1]

MICROBIOLOGIA 2016-2

Docente:

CARVAJAL ARIAS CAREL ELIZABETH

Lugar de Realización:

Universidad  El Bosque (Laboratorio De Microbiología)

Fecha:

19 De Septiembre Del 2016

Integrantes:

LADINO OSORIO MARIA FERNANDA, SANCHEZ ALGARRA MARIA PAULA  

Resumen:

Objetivo. Llevar a cabo diferentes interacciones entre microorganismos por metodologías tradicionales de enfrentamiento, reconociendo y analizando que clase de relaciones se daban entre ellos. Materiales y métodos. Las relaciones se analizaron utilizando la técnica de Igarashi, que consiste en enfrentar el hongo Fusarium, con el hongo Trichoderma (que actúa como biocontrolador), sembrados a tres centímetros entre ellos en dos cajas, una de agar avena y otra de agar PDA. También se sembró Fusarium en el centro de la caja de Petri y una siembra masiva de Trichoderma alrededor de este; además se hizo una siembra de crecimiento libre de Fusarium en avena. La última técnica utilizada fue la de Gauze, en la cual se enfrentaron las bacterias de la siguiente manera: una siembra masiva de actinobacteria y un triángulo y en cada vértice se sembró una bacteria diferente, estas fueron: E. Coli y Bacillus. Después se hizo un enfrentamiento de Gauze modificado, en el cual se llevó a cabo el mismo procedimiento, pero la siembra masiva fue de E. Coli y en los vértices del triángulo se sembró una actinobacteria.  Resultados. Se obtuvo que mediante las técnicas empleadas el Trichoderma  inhibió el crecimiento de Fusarium Conclusiones.  la técnica de Igarachi y de crecimiento dual, hubo una interacción negativa de amensalismo y antibiosis , y en la técnica de Gauze se inhibió el crecimiento de los microorganismos.Palabras clave: Interacción microbiana-Igarashi-Gauze- Trichoderma- Fusarium- E. Coli.-Biocontrolador.

     INTRODUCCIÓN

Los seres humanos y los microorganismos habitan en el mismo planeta y sus caminos se cruzan de muchas y variadas maneras de modo que las interacciones entre ellos son inevitables. (10) El tipo de población microbiana a la que se expone una persona y el mecanismo de exposición a menudo son consecuencias directas de la actividad de esa persona. Ciertas actividades implican diferentes riesgos de contacto y hay un espectro amplio de actividades o situaciones sobre las que una persona puede tener un control absoluto o carecer totalmente de control (1) (11)(14).

El ambiente juega un papel bastante importante para la interacción microbiana, pues debido a lo mencionado anteriormente, de alguna u otra manera los seres humanos están en contacto con los microorganismos de manera indirecta        y esto repercute a la relación con los microorganismos de diferentes factores que podrían afectar la salud humana.(13)(15) Algunos microorganismos como virus, bacterias, hongos y protozoos, presentes en el aire interior, pueden ser portadores de polen, detritus animal, fragmentos de insectos y ácaros y sus productos de excreción, lo que puede empeorar la calidad ambiental (2)(9). En base a esto, se han generado muchas expectativas para la implementación de nuevas tecnologías para el trabajo de generar antibióticos que actúan en el organismo humano como una potente sustancia química actuando sobre las bacterias e impidiendo su propagación y crecimiento en el organismo. Únicamente no sólo sucede con las bacterias, sino también, ocurre con hongos; es por esto que se acude a hacer controles biológicos como mecanismo de control de plagas y enfermedades que se presentan en muchos aspectos como la agricultura, vida humana, animal y vegetal, entre otros. (4)(6). Con base en el potencial que poseen los microorganismos para modificar el ambiente donde viven, existen básicamente dos formas hipotéticas de hacer prevención de una enfermedad de tipo infeccioso. Una de estas formas de control microbiológico, consiste en prevenir una enfermedad de carácter infeccioso por medio de la sustitución del microorganismo causante de tal enfermedad por otro microorganismo de características similares, pero con la diferencia de ser inocuo para el huésped en el que se está haciendo la prevención; en otras palabras el microorganismo que se utilice con este fin no debe producir ningún daño por sí mismo, ni predisponer al huésped a otras enfermedades, y no desequilibrar el ecosistema en el que reside (3)(7)(8). En el presente informe de laboratorio se hará énfasis en el tipo de interacciones realizadas con unas técnicas implementadas para el análisis in vitro con la que se llevó a cabo la práctica, dando así, un entendimiento al aprendizaje sobre el comportamiento de diferentes microorganismos que actúan en el control biológico, aclarando, que el organismo encargado de controlar el patógeno se conoce como antagonista, y su acción depende del ambiente.

MATERIALES Y MÉTODOS

• Técnica de enfrentamiento dual

En los medios de cultivo PDA y avena se sembraron en dos puntos equidistantes del borde de la caja de Petri y equidistante entre las dos especies sembradas, fusarium y Trichoderma. A una distancia de 3 cm de la pared de la caja de Petri y de la otra bacteria. También se sembró Fusarium en crecimiento libre. Se llevaron a incubación por 7 días a una temperatura de 22 ºC.   [pic 2]

[pic 3][pic 4]

• Técnica de Igarashi:

Esta técnica se realizó en los medios de cultivo agar Avena y en PDA, haciendo en ambas un cuadro de 3 cm por 3 cm, colocando en el centro de este un agente patogeno el cual es Fusarium y alrededor una siembra masiva del controlador en este caso es el Trichoderma. Estos dos procedimientos tuvieron una incubación durante 7 días y por 22ºC, con el fin de analizar la inhibición de Trichoderma frente a Fusarium, al igual que la influencia que tienen los medios de cultivos utilizados en las interacciones microbianas de los microorganismos utilizados.

[pic 5]

• Técnica de Gauze:

Se sembró masivamente actinobacteria en medio de cultivo agar avena, así mismo se colocaron en tres puntos equidistantes tres diferentes especies de bacterias, E. coli y Bacillus, de forma invertida. Se realizó la incubación por 7 días a los 22ºC y al final se midieron los halos de inhibición de las tres bacterias sembradas. Además, se realizó la técnica de Gauze modificada que consistía en colocar en tres puntos equidistantes actinobacteria y se sembró masivamente la bacteria E, coli.

[pic 6]

Resultados

Por medio de la tecnica de enfrantamiento dual, fue posible determinar que es mas efectivo  utilizar un antagonista que crezca primero que el patógeno y que además comience la inhibición de forma temprana.

En el caso de la actinobacteria gracias a los resultados se establece que la presencia de esta es fundamental como agente inhibidor.

En cuanto a las interacciones microbianas, cabe aclarar que son de vital importancia los agentes de control bilologico y las diferentes técnicas de aplicación para la supervision de  microorganismos patógenos, ya que de esta manera se logra establecer  mecanismos de control para la propagación de enfermedades

Tabla de resultados

• Tabla 1.  Técnica de enfrentamiento dual

• Tabla 2.  Técnica de enfrentamiento Igarashi