Introducción de la determinación del "colesterol inmune" en la práctica investigativa de la aterosclerosis coronaria

Introducción de la determinación del "colesterol inmune" en la práctica investigativa de la aterosclerosis coronaria

Lic. Giovanna Pereira Roca, Lic. Arturo Reyes Durán, Lic. Alina Rodríguez Riverón, Dr. Daniel Sánchez Serrano y Dra. Emma Domínguez Alonso

RESUMEN

El objetivo de este trabajo consistió en el montaje y la estandarización de un método para la evaluación de la lipoproteína de baja densidad oxidada contenida en los inmunocomplejos, mediante la cuantificación del colesterol total presente en el precipitado de polietilénglicol denominado "colesterol inmune". El valor de "colesterol inmune" fue comparado con los demás parámetros lipídicos en un grupo de sujetos normales de banco de sangre, y 103 pacientes escogidos consecutivamente al azar entre los asistentes como "casos patológicos" a la consulta de cardiopatía isquémica en el Instituto de Cardiología y Cirugía Cardiovascular, a los cuales se les realizó la angiografía coronaria como parte de su estudio. Como resultado de este trabajo se obtuvo que sólo el "colesterol inmune" se correlacionó significativamente con la severidad de la aterosclerosis coronaria. La sensibilidad y especificidad del método fue de 80 %, los valores predictivos positivo y negativo fueron 84 y 76 % respectivamente. La concentración del "colesterol inmune" fue menor en sujetos normales que en pacientes con aterosclerosis coronaria. Se concluyó que el "colesterol inmune" puede ser empleado como un nuevo marcador diagnóstico en estadios tempranos de la aterosclerosis coronaria.

Descriptores DeCS: ATEROSCLEROSIS CORONARIA/diagnostico; LIPOPROTEINAS DEL COLESTEROL LDL/análisis; FACTORES DE RIESGO; ATEROSCLEROSIS CORONARIA/ enzimología.

El desarrollo actual de las investigaciones en el campo de la aterosclerosis permite acumular muchas evidencias acerca del importante papel que desempeña la modificación oxidativa de las lipoproteínas aterogénicas en la presencia y progresión de esta. La concentración elevada de la lipoproteína de baja densidad (LDL) constituye uno de los mayores factores de riesgo para la aterosclerosis, estudios clínicos, epidemiológicos y genéticos, han demostrado convincentemente que la LDL promueve la formación de la placa de ateroma.1

La LDL oxidada (LDL-ox) aparentemente es más inmunogénica que la LDL nativa, lo que sugiere que el nivel de autoanticuerpos contra esta refleja la extensión in vivo de la oxidación de la LDL nativa. La medición directa de la LDL oxidada en suero o plasma no es factible por causa de la protección que sobre ella tienen los agentes antioxidantes presentes en la circulación general, es por ello que el descubrimiento de los autoanticuerpos contra las LDL oxidadas en suero humano y la formación del complejo inmune estimula la acumulacion de ésteres de colesterol en macrófagos y da lugar a la formación de las células espumosas.2,3

El objetivo de este trabajo es el montaje y la estandarización de la determinación del colesterol contenido en el inmunocomplejo circulante (autoanticuerpo-LDLox) en suero, con una elevada calidad, y factible de ser empleado por los laboratorios clínicos de la red cubana de salud, así como relacionar los niveles de colesterol en el inmunocomplejo circulante (autoanticuerpo-LDLox) con la severidad de la enfermedad arterial coronaria y demás parámetros lipídicos.

MÉTODOS

El complejo inmune circulante fue precipitado del suero combinando volúmenes iguales de suero con polietilénglicol de 6 000 (PEG) 5 %. La mezcla fue incubada en un baño termostatado a 18 h durante 18 h. El complejo fue sedimentado por centrifugación a 6 000 rpm durante 30 min. El precipitado fue lavado 3 veces con PEG 2,5 %. El colesterol contenido en el complejo inmune precipitado fue determinado mediante un kit enzimático-colorimétrico comercial para la determinación de colesterol total de la Boehringer Mannhein.4,5

Evaluación analítica del método

Se realizó la validación analítica para el método desarrollado, mediante los estudios de calibración, repetibilidad, reproducibilidad, recuperación, límite de detección. Se determinó la sensibilidad, especificidad diagnóstica, asi como los valores predictivos positivo y negativo a partir del procesamiento de 50 muestras de suero tomadas de banco de sangre al azar (casos normales), y 65 muestras de pacientes con cardiopatía isquémica.

Estudio clínico

Se realizó un estudio descriptivo transversal para determinar el valor diagnóstico del "colesterol inmune" en la enfermedad arterial coronaria determinada por angiografía, donde se incluyeron un total de 102 pacientes, estos fueron atendidos en la consulta de cardiopatía isquémica del Instituto Nacional de Cardiología y Cirugía Cardiovascular, por ser supuestos portadores de la enfermedad. Los pacientes concurrieron durante el período de 1 año (sin elección alguna), y se les realizó la angiografía coronaria como parte de su estudio. En cada paciente se precisó la edad en años, el sexo, el índice de masa corporal (kg/m2) y el grado de estenosis. Después de un ayuno de 12 h se le extrajo a cada paciente 10 mL/ de sangre por punción venosa, para realizar las determinaciones analíticas del "colesterol inmune" y los demás parámetros lipídicos.

Se calcularon los estadígrafos descriptivos (media, mediana, desviación estándar y valores máximo y mínimo) de las variables cuantitativas, y la distribución de frecuencia de las variables cualitativas. Se determinó el "valor de corte" utilizando el método de máximo chi cuadrado. Se obtuvieron las correlaciones de Spearman entre el "colesterol inmune" y las variables lipídicas. Se comparó este con las variables cualitativas empleando el test no paramétrico de Kruskal-Wallis. Se realizó un análisis multivariado usando la regresión logística, en la que la variable de respuesta fue la presencia de cardiopatía isquémica, y los posibles predictores, las variables lipídicas. Se consideró significación estadística cuando p < 0,05.

RESULTADOS

Se obtuvo una adecuada respuesta lineal, que se corroboró con los resultados del análisis de regresión, donde se pudo computar la recta de mejor ajuste para los puntos. El rango de concentración de la curva fue de 5 a 40 m g/mL. El límite de detección del método fue de 0,5 m g/mL, concentración que se encontró en las muestras de suero utilizadas en el estudio de montaje y estandarización del método.

En la realización del estudio de precisión los resultados fueron satisfactorios, la repetibilidad del método evaluada a través de 3 muestras de suero rindió

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