LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA

INSTITUTO TECNOLOGICO DE[pic 1]

ZACATEPEC

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA 3: EXTRACCIÓN DE ADN.

INTEGRANTES:

• ANTUNEZ GARCIA EDGAR
• HERNÁNDEZ SALINAS MARIO ALBERTO
• MENDEZ CANO AARON DANIEL
• ORTIZ GAMBOA JESUS RAFAEL
• VAZQUEZ LEON EMMANUEL

FECHA DE ENTREGA: 24/09/2015

BIOQUIMICA GRUPO WA

OBJETIVO

Realizar la extracción de ADN de células animales poniendo de manifiesto su estructura fibrilar.

MARCO TEORICO

La molécula de ADN (que es la que se va a extraer en ésta actividad práctica) está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unidas entre sí porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan apareadas. La unión de las bases se realiza mediante puentes de hidrógeno, y este apareamiento está condicionado químicamente de forma que la adenina (A) sólo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C). La estructura de un determinado ADN está definida por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de nucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia de bases la información genética del ADN. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos. Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a descifrar su mensaje genético. La estructura en doble hélice del ADN, con el apareamiento de bases limitado ( AT; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una de las cadenas delimita automáticamente el orden de la otra, por eso se dice que las cadenas son complementarias. Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena, se deduce inmediatamente la secuencia de bases de la complementaria.   

La purificación del DNA permite:

 1. Identificar mutaciones.

2. Ver características propias de los tipos de DNA (Polimorfismo).

3. Para clonar (Genes específicos, fragmentos de cromosomas o individuos).

4. Aislar DNA afectado y compararlo con uno bueno.

5. Detectar en las muestras, la presencia de un largo espectro de agentes patogénicos.

6. Identificar resistencia microbiana.

7. Evaluar desordenes genéticos, neurodegenerativos, neoplásicos, imunológicos.

8. Medicina forense para la identificación de personas.

9. Para hacer tests de paternidad.

El rendimiento de la prueba de ADN radica en que los miles de pares de bases que se reparten de forma secuencial y determinada para cada persona permiten seleccionar a un único individuo entre todos los de su especie si se conoce esa secuencia.

Es Importante Diferenciar dos Conceptos

 • Extracción: sacar los componentes desde un compartimento celular. Involucra:

   – Lisis de las células que contienen a los AN

   – Inactivación de nucleasas

   – Clarificación: separación de los AN de los restos celulares

 • Purificación: Separación de AN:

– De proteínas solubles.

– De otros AN no deseados.

– De Lípidos, carbohidratos,

De sales y otros compuestos orgánicos.

MATERIAL.

• 2 Tubos de ensayo de 16 ml de capacidad.
• 1 Vaso de precipitados de 50 ml.
• 1 Baño María.
• 1 Embudo pequeño.
• 1 Agitador de vidrio.
• 2 Láminas de papel filtro.
• 1 Gradilla.
• 1 Pipeta Pasteur.

SOLUCIONES.

• Hígado de pollo fresco.
• Solución salina con NaCl al 10%.
• Ácido tricloroacético al 15%.
• Alcohol isopropílico.

PROCEDIMIENTO

1. Nos conducimos a leer las indicaciones del profesor que previamente nos había proporcionado para así tener una mejor perspectiva para llevar acabo la práctica. Posteriormente lavamos material.          

1. En un recipiente se colocó el hígado con un poco de agua destilada y se procedió a macerarlo. Simultáneamente, las soluciones ácida y salina, respectivamente, fueron preparadas.

1.   Con las soluciones listas, se colocó una muestra de 10 ml de solución de hígado (aproximadamente) en el vaso de precipitados junto con 10 ml de solución ácida y fueron mezcladas.

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1. Habiendo colocado una lámina de papel filtro, estratégicamente, en el embudo, se filtró la mezcla. Se recuperó el coágulo seco del papel y se puso en un tubo de ensayo.

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1. Posteriormente se agregaron 10 ml de la solución salina, se mezcló y la colocamos en un baño María a 95 C durante aproximadamente 3.5 minutos.[pic 6][pic 7]

1. Se filtró la muestra recuperando la fase líquida en otro tubo de ensayo. Luego se agregaron aproximadamente 2 ml de alcohol lentamente, y se pudieron  observar en la muestra las hebras de ADN, que era la sustancia blanca.

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RESULTADOS

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CONCLUSION

El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se formaron dos capas separadas, toda la grasa y proteína que rompimos en los dos primeros pasos y el ADN tiene que decir:
"¿Mmmmm... a que capa debería de ir?"

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