Metodo de lowry y metodo de bradford

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

MÉTODOS DE ANÁLISIS

NOMBRE: SERRANO PINZÓN ERIKA

NOMBRE DEL PROFESOR: CAROLINA ACUÑA GONZÁLEZ

GRUPO: 4IM2        SECCIÓN: 1

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR LOS MÉTODOS DE LOWRY Y MÉTODO DE  BRADFORD.

Objetivos

1. Elaborará una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotoeléctrico.
2. Determinará el efecto de algunas sustancias no proteínicas, que pueden interferir en el método.
3. Determinará si hay diferencia estadísticamente significativa en la precisión y la exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
4. Analizará las ventajas y desventajas del método de Lowry y de Bradford, con respecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas.

Fundamento del método de Lowry

El método de Lowry se basa en determinación espectrofotométrica. Este método se lleva a cabo en dos etapas, la primera reacción se basa en la formación del complejo de cobre y proteína (usando la reacción del Biuret) en medio alcalino.  La segunda reacción colorida incluye el reactivo de Folin que reacciona con los aminoácidos aromáticos (triptófano y tirosina) de la proteína.

Fundamento del método de Bradford

Este método se fundamenta en la formación de un complejo colorante-proteína, el colorante azul brillante de Coomassie G-250 provoca un desplazamiento al máximo de absorción de este compuesto, desde 465 nm a 595 nm. Las proteínas presentan grupos ionizables.

DATOS EXPERIMENTALES DEL MÈTODO DE LOWRY

TABLA No. 1. CURVA DE CALIBRACIÓN DE HEMOGLOBINA. MÉTODO DE LOWRY.

Operaciones para determinar la cantidad de proteína en µg presente en cada tubo.

Se utilizó hemoglobina 0.25 mg/mL

Tubo 1.

0.1 mL () ()= 25 µg                      [pic 3][pic 4]

Tubo 2.

1. mL () ()= 50 µg[pic 5][pic 6]

Tubo 3.

0.3 mL () ()= 75 µg                      [pic 7][pic 8]

Tubo 4.

1. mL () ()= 100 µg[pic 9][pic 10]

Tubo 5.

1. mL () ()= 125 µg                      [pic 11][pic 12]

GRÁFICA 1. CURVA DE CALIBRACIÓN. MÉTODO DE LOWRY

[pic 13]

Donde los puntos encerrados en un círculo son los datos que se toman para hacer regresión lineal.

1. Calcule y escriba los valores de la pendiente, ordenada al origen y el coeficiente de correlación. Diga cómo se interpretan para la curva de calibración.

Ecuación de la línea recta [pic 14]

Ordenada al origen=a= - 0.0169

Pendiente=b= 2.86x10-3

Coeficiente de correlación=r= 0.99

Ecuación empírica       [pic 15]

TABLA No. 2. ABSORBENCIA OBTENIDA MEDITANTE LA ECUACIÓN EMPÍRICA. MÉTODO DE LOWRY.

GRÁFICA No. 2. CURVA DE CALIBRACIÓN LINEALIZADA DE HEMOGLOBINA. MÉTODO DE LOWRY

[pic 16]

1. ¿Cumple su curva de calibración la Ley de Bouger y Beer? ¿Entre qué límites de cantidad de proteína?

Si, entre 25 µg y 75 µg.

1. A partir de la recta ajustada por regresión lineal y la ecuación de la misma, obtenga la expresión matemática para calcular la cantidad de proteína.

Ecuación empírica   [pic 17]

Cantidad de proteína  [pic 18]

TABLA No. 3. RÉPLICAS PARA EL ANÁLISIS ESTADÍSTICO. MÉTODO DE LOWRY

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