Determinación de proteínas por el método de Bradford y su comparación con el método de Lowry

Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de bioquímica

Laboratorio de métodos de análisis

Práctica 3: Determinación de proteínas por el método de Bradford y su comparación con el método de Lowry

Grupo: 5QV1 Sección: 1

Hernández Barrera Daniel Bernardo

Compañero: Almeida Sánchez Brayan Iván

Profesora: Larios Serrato Violeta

Fecha de entrega: 11/3/16

Fundamento

El método de Bradford es muy rápido y requiere aproximadamente de la misma cantidad de proteína que el método de Lowry. Es bastante preciso y las muestras que están fuera del intervalo pueden ser sometidas al método nuevamente en cuestión de minutos. El método de Bradford es recomendado para uso general. Especialmente para determinar el contenido proteico de fracciones celulares y monitorear concentración de proteínas para electroforesis en gel. El método se basa en la observación de que la absorbancia máxima de una solución ácida de azul de Coomassie G-250 cambia de 465 a 595 nm cuando éste se une a las proteínas. Ambas interacciones (hidrofóbicas y iónicas) estabilizan la forma aniónica del colorante, provocando un cambio de color notable. Una desventaja menor es que el colorante es adsorbido en material de virdio, celdas espectrofotométricas, y ropa, pero es removido con soluciones diluidas de SDS.

Objetivos

• Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
• Determinar el efecto de algunas sustancias no proteínicas, que pueden interferir en el método.
• Determinar si hay diferencia estadísticamente significativa en la precisión y exactitud respecto al método de Lowry.
• Analizar las ventajas y desventajas de éste método, con respecto a otros métodos para la determinación cuantitativa de proteínas.

Resultados

Tabla 1. Datos para la curva de calibración de albúmina por el método de Bradford.

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Fig. 1. Curva de calibración de albúmina para el método de Bradford.

Tabla 2. Réplicas para el análisis estadístico de albúmina por el método de Bradford y su comparación con el método de Lowry.

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