Determinación de proteínas por el método de Lowry

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Métodos de análisis

Determinación de proteínas por el método de Lowry

Sánchez Ortega Jesús Adrián

4IV1 Sección: 1

Introducción

El método de Lowry es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer A= ε.l.c

1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenólicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato.

2) La reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenólicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenolicos da lugar a un complejo de color azul intenso.

Resultados

Curva de calibración

Tubo Cantidad de proteína μg A_590 〖promedio A〗_590

1 25 0.08 0.062 0.071

2 50 0.102 0.09 0.096

3 75 0.152 0.136 0.144

4 100 0.209 0.179 0.194

5 0 0.252 0.261 0.256

Grafica 1 grafica 2

Teniendo únicamente cuatro ensayos no se podrían descartar puntos de la gráfica sin embargo no nos afecta porque todos se apegan a la ley de Bouger-Beer.

Tratando la gráfica 1 con regresión lineal obtenemos la gráfica 2 y la siguiente ecuación:

y = 0.0017x + 0.022

Donde:

La pendiente (0.0017) es una constante que depende de la longitud de onda usada, de la proteína, y el espesor de la celda utilizada. Además está relacionada con la sensibilidad del método.

La ordenada al origen (0.022) es la absorbancia cuando no tenemos proteína es decir en el tubo blanco (tubo 5)

El coeficiente de correlación es la exactitud o variación entre la cantidad de proteína calculada y la práctica.

Despejando la cantidad de proteína de la ecuación anterior:

X= (y-0.022)/0.0017

Análisis estadístico

tubo A_590 Cantidad de proteína μg

1 0.154 77.64

2 0.180 92.94

3 0.139 68.82

4 0.148 74.11

5 0.148 52.35

6 0.111 52.35

7 0.111 52.35

8 0.139 58.82

9 0.122 58.82

10 0.136 67.05

Xi-x ̅ 〖(Xi-x ̅)〗^2

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