Determinación De Proteínas Por El método De Lowry Y Bradford

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE LOWRY Y BRADFORD.

Resultados.

Curva tipo Albúmina por Lowry

Tubo Proteína (µg) A590

serie a

1 25 0.079

2 50 0.118

3 75 0.195

4 100 0.252

5 125 0.309

serie b

1´ 25 0.065

2´ 50 0.152

3´ 75 0.190

4´ 100 0.249

5´ 125 0.287

Por medio de las lecturas realizadas en el espectrofotómetro se obtuvieron los siguientes resultados y la ecuación de la recta para la elaboración de la curva tipo con albúmina por ambos métodos.

Curva tipo Albúmina por Bradford

Tubo Proteína (µg) A590

serie a

1 25 0.181

2 50 0.349

3 75 0.511

4 100 0.740

5 125 0.776

serie b

1´ 25 0.227

2´ 50 0.357

3´ 75 0.510

4´ 100 0.719

5´ 125 0.767

Se tomaron lecturas de las réplicas realizadas para poder obtener las absorbancias y la cantidad de proteína que contenía cada una interpolando en las gráficas anteriores de igual forma se realizó con las interferencias.

También se puede obtener la cantidad de proteína con la siguiente formula:

x= (y-b)/m

Albúmina Lowry

Curva tipo Replicas Interferencias

µg A590 A590 µg Sustancia A590 µg Tipo

25 0.079 0.187 73.85 Fenol 1% 1.763 768.12 Positiva

25 0.065 0.211 84.42 Mercaptoetanol 0.1% 0.219 87.95 Positiva

50 0.118 0.207 82.66 Tris 1M pH 10 0.154 59.31 Negativa

50 0.152 0.210 83.98 Urea 5% 0.193 76.49 NO

75 0.195 0.191 75.61 (NH4)2SO4 3% 0.184 72.53 Negativa

75 0.190 0.225 90.59

100 0.252 0.226 91.03 Límite confianza (µg) 75.09 85.46

100 0.249 0.183 72.09

125 0.309 0.182 71.65

125 0.287 0.194 76.93

Albúmina Bradford

Curva tipo Replicas Interferencias

µg A590 A590 µg Sustancia A590 µg Tipo

25 0.181 0.569 84.15 Fenol 1% 0.634 94.90 Positiva

25 0.227 0.634 94.90 Mercaptoetanol 0.1% 0.598 88.94 NO

50 0.349 0.586 86.96 Tris 1M pH 10 0.647 97.05 Positiva

50 0.357 0.575 85.14 Urea 5% 0.583 86.46 NO

75 0.511 0.625 93.41 (NH4)2SO4 3% 0.569 84.15 Negativa

75 0.510 0.560 82.66

100 0.740 0.636 95.23 Límite confianza (µg) 85.46 92.29

100 0.719 0.576 85.30

125 0.776 0.594 88.28

125 0.767 0.622 92.91

Para conocer si había interferencias y de ser así saber si eran positivas o negativas se calcularon los límites de confianza de la media con la siguiente formula:

µ=x ̅±ts/√n

t = 2.262 para ambos métodos.

Si la cantidad de proteína se encontraba entre los límites establecidos no había interferencia, si la cantidad de proteína es superior la interferencia es positiva pero si la cantidad de proteína es inferior la interferencia es negativa.

De la cantidad obtenida de proteína en las réplicas se obtuvieron la media, la desviación estándar, la varianza, el coeficiente de variación y el % de error. Una vez obtenidos estos datos se prosiguió a realizar la prueba de t de Student y de F.

Albúmina (µg)

Replica Bradford Lowry Di

1 84.15 73.85 10.30

2 94.90 84.42 10.48

3 86.96 82.66 4.30

4 85.14 83.98 1.16

5 93.41 75.61 17.80

6 82.66 90.59 -7.93

7 95.23 91.03 4.20

8 85.30 72.09 13.21

9 88.28 71.65 16.63

10 92.91 76.93 15.98

Promedio 88.89 80.28 8.61

Des. Estándar 4.78 7.26 8.15

CV (%) 5.37 9.04

Error rel. (%) 18.53 7.04

Varianza 22.80 52.70

L. confianza 3.41 5.18

L. C. inferior 85.4 75.09

L. C. superior 92.29 85.46

Discusiones.

Lowry.

En la curva tipo por el método de Lowry podemos observar que cumple la ley de Bouger y Beer debido a que conforme aumenta la cantidad de proteína aumenta la concentración de color encontrándose proteína entre los límites de 25 y 125 µg.

Los valores encontrados de la recta fueron: a (ordenada al origen) = 0.0193500 siendo una constante

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