Practica 7: Cuantificación de proteínas por el método de Bradford y Lowry

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Bioquimica

Practica 7: Cuantificación de proteínas por el método de Bradford y Lowry

Integrantes de equipo:

Hernández Vargas Suelem Zuleika

Jiménez Herrera Brenda Guadalupe

Martínez García Anastasio Isaac

Resendiz Romero Diana Laura

Vergara Nuñez Iris Guadalupe

Equipo: 5

Profesores:

M en P Juan Carlos Rodríguez Huerta

QFB Juana Alicia Alquicira Camacho

Grupo: 2251

16 de abril de 2013

Índice

Resumen ……………………………………………………………….. 3

Introducción ……………………………………………………………..3

Objetivos …………………………………………………………….…...4

Marco teórico ……………………………………………………………4

Material ……………………………………………………………….….7

Metodología ……………………………………………………….…….7

Resultados obtenidos ………………………………………………..

Discusión ………………………………………………………………

Conclusiones ………………………………………………………….

Recomendaciones y sugerencias ….………………………………….

Bibliografía ……………………………………………………………….

Resumen.

1.-En esta práctica se buscó cuantificar las proteínas basándose en la unión de un colorante, utilizando el método de Bradford. En el cual se emplea el azul brillante de Coomassie, está diseñado para cuantificar de 1-10mg de proteína.

Para obtener los resultados se preparó una serie de pozos en una placa de cultivo de 96 pozos auxiliándonos de micropipetas (agregando albumina de suero de bovino, Hidróxido de sodio, solución buffer de fosfatos y muestra) al término del llenado se procedió a utilizar el lector de ELISA, el cual determina la absorbancia. Al obtener los resultados, mediante el programa Excel se obtuvieron los resultados necesarios para graficar.

2.- En esta práctica se analizó el tema de cinética de la ureasa.

Entre nuestros objetivos específicos se encontraba saber la importancia de las enzimas en los procesos bioquímicos. La presencia de enzimas en los procesos bioquímicos permite a la célula una optimización fisiológica de recursos moleculares y energéticos.

La metodología consistió en preparar los tubos de ensayo con cierta cantidad de urea, amortiguador, HgCl2 al 1 %, ureasa; mediante una variación en la concentración de sustrato (urea), concentración de enzima (ureasa), temperatura y pH.

Introducción.

Las proteínas constituyen las unidades estructurales a partir de las cuales se ensamblan las células, y representan la mayor parte de su masa seca. Pero además de proporcionarle forma y estructura a la célula, las proteínas también llevan a cabo la mayor parte de sus numerosas funciones. Las enzimas promueven las reacciones químicas intracelulares mediante la provisión de superficies moleculares intrincadas, circuladas por salientes y hendiduras que pueden retener o repeler moléculas específicas. Las proteínas inmersas en la membrana plásmatica forman los canales y las bombas que controlan el pasaje de nutrientes y de otras moléculas pequeñas hacia la célula y desde ésta. Otras proteínas llevan mensajes de una célula a otra, o actúan como señales integradoras que retransmiten información desde la membrana hacia el núcleo de una célula. Incluso otras sirven como pequeñas maquinas moleculares con partes móviles. Proteínas especializadas también actúan como anticuerpos, toxinas, hormonas, moléculas anticongelantes, fibras elásticas o generadores de luminiscencia.

La multiplicidad de funciones que desempeñan las proteínas son el resultado de un gran número de formas diferentes que adoptan; la estructura dicta la función.

Para el estudio de la estructura de una proteína, de la actividad de una enzima o el contenido proteínico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de las proteínas.

Se han desarrollado diferentes técnicas que se basan en la formación de complejos coloridos entre las proteínas y reactivos específicos.

MÉTODO VENTAJAS APLICACIONES

Bradford Limite bajo de detección

Compatible con agentes reductores

Rapidez Resultados rápidos

Muestras que contienen agentes reductores

Lowry Color estable

Preciso Mayormente usado

Útil para cuantificar proteínas de membrana

Los métodos directos de cuantificación de la proteína se basan en algunas características propias de las estructuras proteícas, como la capacidad de reducir determinados iones, propiedades del enlace peptídico o el contenido de algún aminoácido particular; a partir de estos datos, se puede deducir la cantidad total de proteína presente en la muestra.

Entre las técnicas colorimétricas diseñadas para este fin se encuentran: el método de Lowry (1951), basado en la cuantificación de los grupos fenólicos, que permite valorar el aminoácido tirosina, único aminoácido fenólico de las proteínas; el método de Bradford (1976), que cuantifica los aminoácidos básicos y aromáticos.

Para cualquier método colorimétrico es necesario realizar una curva patrón que sirva de apoyo en la determinación de la concentración de la proteína de una o varias muestras problema. La curva se elabora con una disolución de proteína cuya concentración es conocida, como lo es en este caso la albumina de suero de bovino.

Objetivos:

Generales.

• Determinar la concentración de proteínas de una muestra a través del método de Bradford

• Realizar una curva de calibración para cada método

• Aprender el uso del espectrofotómetro para medir la absorbancia

Específicos.

• Su fundamento, sus ventajas e inconvenientes de este método de identificación.

• Conocer las diferentes

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