Pràctica de laboratorio extracciòn del ADN

PRACTICA #7

EXTRACCION DE ADN

INTRODUCCION

La biotecnología es el uso y la manipulación de organismos vivos para proveer bienes y servicios productivos que deben de beneficiar a la humanidad.  La biotecnología moderna usualmente involucra la manipulación de ácido desoxirribonucleico.  ADN de organismos vivos.  La tecnología del ADN recombinante generalmente involucra el aislamiento del ADN o genes.

Cuando un científico necesita una fuente de ADN, esta debe ser extraída de las células que están siendo estudiadas.

Para extraer y visualizar el ADN, es necesario contar con una larga cantidad de ADN dentro de un tubo de ensayo.  ¿Alguna vez has estado caminando por el bosque, solo para descubrir que se ha tropezado con una tela de araña?  Las hebras de la tela de araña son tan delgadas que no son fáciles de detectar hasta que se está cerca de ella.  De la misma forma, el ADN es muy delgado (mucho más delgado que las hebras de la tela de araña).  Sin embargo si se toman miles de esas hebras y se unen se vuelven más visibles.  Esto significa que el ADN debe ser extraído de un gran número de células.  La fresa octaploide, contiene ocho copias de cada tipo de cromosoma.  Esto provee una gran cantidad de ADN que puede ser aislado de una o dos fresas.

OBJETIVOS

• Extraer el ADN de fresas utilizando un protocolo de extracción de ADN
• Separar adecuadamente las membranas plasmáticas y la membrana nuclear para liberar el ADN

REACTIVOS

• 10ml de buffer de extracción de ADN
• Etanol frío (remojado en hielo)
• Solución buffer *

MATERIALES ADN FRESAS

• 1 fresa *
• 2 bolsa plástica ziploc *
• Papel filtro  
• Palillo de madera

Nota: los materiales marcados con asterisco los debe aportar el alumno.

PROCEDIMIENTO CON LA FRESA

Degradación de células y núcleos

1. Colocar la fresa dentro de la bolsa ziploc.  Utilice el puño para triturar suavemente las fresas durante un minuto.  Esto comenzara el rompimiento de las células (maceración).

2. Preparar la solución buffer (90 ml de jabón líquido y 10 ml de agua)

3. Agregar aproximadamente 10ml del buffer de extracción de ADN a la bolsa con fresas.  Presione la bolsa para remover el aire dentro de ella y ciérrela.  Continúe triturando suavemente las fresas durante un minuto (trate de no generar demasiada espuma), esto continuara con la degradación de las células y el núcleo.

4. Coloque el papel filtro o la gasa  sobre el vaso plástico.  Corte la esquina de la bolsa plástica y envuelva la esquina con gasa o papel filtro.  Filtre el extracto de fresas dirigiendo con la varilla de madera

5. Una vez el vaso plástico tena suficiente líquido (un dedo de altura es suficiente, no más de ¼  de su capacidad) pare la filtración.  Recuerde cerrar su bolsa antes de dejarla de usar.  El paso de la filtración es necesario para capturar los materiales celulares largos.  El extracto de ADN se ha filtrado al vaso.

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