INFORME DE LABORATORIO PRACTICA AISLAMIENTO DEL ADN

INFORME DE LABORATORIO

AISLAMIENTO DEL ADN

PRACTICA No. 6

BRAYAN JOSE NIÑO NAVARRO, CESAR ANDRES NUÑEZ.

INTRODUCCION.

El ADN es una macromolécula compleja compuesta por dos cadenas o hélices que se entrelazan entre si formando una doble hélice. Cada cadena está formada por millones de eslabones llamados nucleótidos o bases nitrogenadas (son 4 A-T, G-C).

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un tipo de ácido nucleicos, una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su transmisión hereditaria.

El ADN conocido también como la molécula de la vida o la molécula de la herencia, es la molécula que contiene toda la información (genes) necesaria para que se desarrolle un ser vivo y para que funcione como tal. Pero el ADN no es un mero almacén de información, sino que también, y gracias al proceso de replicación, es capaz de transmitirla de una generación a la siguiente en el proceso de la división celular.

Fue aislado por primera vez en el invierno de 1869 por Johann Friedrich Miescher, médico suizo que estudiaba la composición química de los glóbulos blancos que obtenía del pus de vendajes quirúrgicos.

En uno de sus experimentos, al utilizar los núcleos aislados de los leucocitos, aisló un precipitado con propiedades que no correspondían a sustancias lipídicas y que no era destruido por proteasas (enzimas que degradan las proteínas). Esto le indujo a pensar que se trataba de otro tipo de sustancia, de composición desconocida hasta la fecha, y la llamó nucleína. Posteriormente, demostró que la nucleína tenía carácter ácido y aisló la misma sustancia en otras células y en esperma de salmón. Esta nucleína aislada corresponde al ADN y a las proteínas histónicas sobre las que se enrolla.

Fueron necesarios 70 años más para que se dilucidara la composición química exacta y la estructura del ADN.

El objetivo es aislar y observa al ADN extraído de forma rudimentaria.

METODOLOGIA Y PROCEDIMIENTO.

1. Se preparó el tampón con los siguientes ingredientes y se mantuvo en un baño de hielo triturado:

• 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.
• 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
• 5 g de bicarbonato sódico.
• 5 ml de detergente líquido o champú.

2. Se eligió la muestra que se usó para proporcionar el ADN entre los vegetales, la cual fue la cebolla y se cortó en cuadraditos.

3. Luego se trituro la muestra con un poco de agua en un mortero. Así se rompieron muchas células y otras quedaron expuestas a la acción del detergente.

4. Se Mezcló en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y se agito vigorosamente durante al menos 2 minutos. Después se separon los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Luego se centrifugo a baja velocidad durante 5 minutos y después se pipeteo el sobrenadante.

5. Se retiraron 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y se añadió con una pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se dejó escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedo flotando sobre el tampón.

6. Por último se introdujo la punta de una varilla estrecha hasta llegar justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Luego se removió la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se fueron enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto se retiró la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedo adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

RESULTADOS OBTENIDOS

CUESTIONARIO

¿Qué dificultades se presentaron para la realización de la práctica?

...