PRACTICA EXTRACCION DE ADN

PRACTICA #3

EXTRACCION DE ADN

Objetivos

-Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.

- Observar la estructura fibrilar del ADN.

- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN

MATERIAL Y METODOS

• Tomar muestra de los tejidos.

• Preparar mezcla

• Separar en tubos de ensaye

• Extraer muestra de ADN

RESULTADOS Y MARCO TEORICO

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula

El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución ablandadora de carne actúa como una enzima.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología.

Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN

-EL ADN

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.

Está formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez están formados -D desoxirribosa y un ion fosfato.

La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los poli nucleótidos.

El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:

Estructura primaria:

Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina, citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un esqueleto de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que queda un extremo con -OH 3´ libre y un extremo 5´ con un grupo fosfato libre.

Estructura secundaria:

Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.

Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos:

El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice dextrógira. Las dos hebras son anti paralelas es decir si una presenta la dirección 5´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.

El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre diferentes regiones de la molécula, hasta adoptar la conformación más estable, que es la de doble hélice. Este enrollamiento entre las 2 hebras de la doble hélice es dextrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si estuvieran trenzadas.

Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre las bases de ambas cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina y la guanina frente a la citosina. Así las bases púricas están enfrentadas a las bases pirimidínicas y la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los pares A=T y

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