PRACTICA EXTRACCIÓN ADN

PRÁCTICAS DE LABORATORIO 4º ESO

9.- EXTRACCIÓN DEL ADN

OBJETIVOS

1. Utilizar técnicas sencillas para extraer el ADN de un tejido vegetal.

2. Observar su estructura fibrilar.

3. Observar la longitud de las fibras y confirmar que en el núcleo, el ADN se encuentra replegado.

FUNDAMENTO

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas:

a. En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula.

b. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.

Con la sal (NaCl), creamos un medio hipertónico que provoca el estallido de las células y los núcleos, quedando libre las fibras de cromatina.

Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y ayudan a destruir su estructura.

El alcohol se utiliza para aislar y hacer que el ADN precipite. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita quedando entre el alcohol y el agua.

MATERIALES

• Tejido vegetal (manzana, Kiwi, etc..)

• Agua destilada.

• Sal de mesa.

• Detergente líquido.

• Alcohol 96º muy frío.

• Batidora.

• Colador.

• Vaso de precipitado grande y otro pequeño.

• Tubo de ensayo.

• Varilla fina/cuchara/espatúla.

• Aguja mangada/ pinzas

• Pipeta.

• Probeta.

• Cuchara.

• Cuchillo.

• Microscopio óptico.

• Porta y cubreobjetos.

• Frasco lavador con agua.

• Placa Petri.

• Tinte: azul de metileno.

PROCEDIMIENTO

1. En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente de lavavajillas.

2. Añade una cucharada de sal.

3. Añade 25 mililitros de agua destilada. Utiliza la probeta para medirlos.

4. Pela y corta la manzana en cuadrados.

5. Añade un poco de agua en el vaso de precipitado grande y echa los trozos de manzana. Tritúralos con la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células.

6. Mezcla en el recipiente grande, el triturado celular con la disolución de detergente y sal.

7. Agita con la varilla la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.

8. Haz pasar el líquido obtenido por un colador.

9. Utilizando la pipeta, retira 5 ml. De la mezcla a un tubo de ensayo. Añade 5 mililitros de alcohol enfriado a 0º C, deja escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla.

10. Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme

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