Practica Micro 1

[pic 1][pic 2]

[pic 3][pic 4][pic 5]

INTRODUCCIÓN

Es evidente la notable confusión que un estudiante puede atravesar al ingresar al mundo microbacteriano donde las características macroscópicas de un  cultivo no lo son todo, sino que a esto se suman distinciones microscópicas que representan a cada grupo bacteriano.

En esta práctica se pretende que el alumno aprenda a distinguir entre el género Staphylococcus y Streptococcus.

Staphylococcusaureus (el miembro más conocido y virulento de esta familia)y Streptococcus pertenecen notablemente al grupo A y en su conjunto se componen de  una gran gamma de exotoxinas conocidas como pirógenos, a las cuales se les atribuye el nombre de superantígenos. Estas toxinas son las causantes del shock toxico y se han visto implicadas en varias enfermedades alérgicas, así como autoinmunitarias. Dentro de este tipo de proteínas nos encontramos a las enterotoxinas estafilocócicas clasificadas en 18 serotipos de la A-R. La toxina-1 causantes del shock tóxico producida y las toxinas exfoliativas A y B también producidas por S. aures; a las exotoxinas pirógenas estreptocócicas del grupo A, en sus serotipo SpeA, SpeB, SpeC y SpeF; y otras toxinas relacionadas con los grupos B, C, F y G estreptocócicas. Todos estos superantígenos son una generalización a lo que se describe más específicamente de cada familia.

Una manera de diferenciar entre estas dos familias de bacterias es mediante la presencia de la enzima catalasa. Pues Staphylococcus, arroja una prueba catalasa-positivo a diferencia de la familia Streptococcus que carecen de esta enzima.

Otra manera de identificar el género de familia del cual se está hablando es a través de cultivos ya que los estafilococos crecen muy bien en agar sangre y se pueden aislar de forma selectiva en el agar manitol-sal y manitol, que es fermentado por S. aureus pero no por la mayoría de las especies restantes de estafilococos; mientras que los estreptococos requieren aislamiento con medios enriquecidos con suero o sangre y no crecen en agar manitol.

La identificación de las bacterias también se lleva mediante el empleo de la prueba de coagulasa, presente en los estafilococos.

Entender los diferentes métodos para diferenciar géneros y especies bacterianas resulta de gran relevancia para el sector salud.

MATERIALES Y MÉTODOS

CULTIVO EN PLACA

Material y Reactivos

Caja Petri, Mechero, Asa de Nicromio, Caldo de Tioglicolato, Hisopo, Incubadora y los Agares sangre, MacConkey y Sal manitol

Método

1. Flamear el asa hasta el rojo en toda su longitud empezando por la parte cercana al mango.

2. Tomar una asada del cultivo que va a inocular y hacer tres series de estrías, cada una en una   zona de la caja, a 90° de la anterior

3. Incubar todas las placas a 35°C por 24 horas.

5. Marcar todas las cajas y tubos con: Nombre o número de equipo

PRUEBA DE LA CATALASA         

Material y reactivos         

Portaobjetos. H2O2 de 10 volúmenes Cultivos en fase exponencial de bacterias. Asas e hilos de siembra. Pipetas Pasteur.

Método         

1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur.

2. Suspender la bacteria

3. Detectar la formación de burbujas

TINCIÓN DE GRAM

Material y Reactivos

Portaobjetos, Agua destilada, Pipetas Pasteur, Cristal Violeta, Yodo Lugol, Alcohol acetona y Safranina.

Procedimiento

1. Fijación: Colocar una pequeña gota de agua destilada en el portaobjetos con la pipeta, re-suspender muestra en el portaobjetos y secar con el mechero.
2. Tinción: Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo toda la muestra por 1 min. luego se lava con agua corriente.
3. Luego debe agregarse el Yodo Lugol. Este debe aplicarse como el cristal y también debe cubrir la muestra por 1 min. Luego se lava con agua corriente
4. Cubrir la muestra con alcohol acetona para decolorarla es el paso más crítico del procedimiento. Este debe de cubrir la muestra por un  tiempo de 30 de segundos y la reacción debe de ser detenida con el lavado de agua corriente.
5. Agregar una tinción de contraste, para teñir las bacterias que pierden el cristal violeta. Para eso se agrega Safranina cubriendo la muestra por 1 min y luego se lava con agua corriente y se deja secar.

PRUEBA DE LA COAGULASA

Materiales y Reactivos

Tubo de Ensayo, Asa y suero

Método

En un tubo de vidrio agregar 0.5ml de plasma, luego tomar una asada de una colonia y mezclar suavemente. Incubar a 37 C por 24 horas.

1. Si es positivo, (ejemplo S. aureus) el suero coagulara dando como resultado un coagulo.
2. Si es negativo, el plasma permanece líquido (Ej. S. Epidermitis).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Para la presentación de los diferentes resultados que esta práctica nos arrojó, a continuación analizaremos y discutiremos cada uno de ellos en orden para realizar la diferenciación y el diagnostico de nuestra muestra recolectada.

Medios de cultivo

El crecimiento en los tres medios de cultivo está descrito en la Tabla 1.1. En el medio de cultivo agar sangre también era conveniente observar si se presentaba o no hemolisis y según la extensión de la zona de hemolisis, clasificar las colonias como α, β o γ hemolíticas; sin embargo, no se pudo identificar correctamente si esta propiedad se presentaba, ya que existieron dos limitaciones: 1) probablemente no se tomaron suficientes bacterias de la muestra que pudieran realizar hemolisis con una buena apreciación; y 2) el tiempo de incubación fue muy corto.

...