Proteinas. Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos

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FUNDAMENTO:

 Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. el sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen dos o mas enlaces peptídicos dando un complejo de color violeta llamado complejo Biuret. La intensidad del color obtenido es una medida del numero de enlaces peptídicos presentes en la proteína.

METODO:

El reactivo de Biuret está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O).

MATERIALES:

• Tubos de ensayo
• Gradillas
• Mechero
• Pipetas
• Propipetas
• Baño maria
• Hornilla
• Espectofotometro
• Agua destilada

REACTIVOS:

• Sulfato de cobre (2-5%)
• OHNa al 40%
• Clara de huevo, suero u otra muestra

PROCEDIMIENTO:

• A un 1 ml de la solución proteica añadir 0,5ml de OHNa al 40%
• Añadir 2-3 gotas de sulfato de cobre al 2%[pic 2]

TIPO DE REACCION: Cuantitativa

• la absorbancia del color producido es leído a 540nm

la intensidad del color (absorbancia) es proporcional al contenido proteico de la muestra

[pic 3]

VENTAJA: Bastante específico para proteínas Muestra pocas interferencias y es barato

DESVENTAJA:  La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero). 

[pic 4]

FUNDAMENTO:

Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas

METODO.

MATERIALES Y REACTIVOS:

Tubos de ensayo

 Pipetas de automáticas regulables de 20-100 µl y de 200-1000 µl 3

 Espectofotómetro

Agua destilada

 Soluciones estándar de proteína

Reactivo de Bradford

PROCEDIMIENTO:

Añadir 1 ml del reactivo de Bradford a los tubos estándar y muestras problemas preparadas. Dejar a temperatura ambiente y leer Absorbancia a 595 nm frente al blanco. El color es estable 1 hora

TIPO DE REACCION: el método de bradford es un metodo cuantitativo[pic 5]

VENTAJAS:

• Es un método rápido (la reacción se puede completar en 2 min)
• Reproducible
• Es muy sensible (mas que el método de lowry)
• No existe interferencias de cationes como K, Na y Mg

DESVENTAJAS:

• El complejo proteína-colorante formado puede unirse a las celdas de cuarzo
• El color variacon diferentes tipos de proteínas
• La proteína estándar debe seleccionarse con mucho cuidado
• Interferencia con detergentes

FUNDAMENTO:[pic 6]

El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un método analítico capaz de monitorizar el ión cuproso producido en una reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio alcalino (reacción de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromóforo proporciona un método para la cuantificación de proteínas que es sencillo, rápido, muy sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros métodos. OHProteína + Cu2+ → Cu1+ Cu1+ + BCA → complejo púrpura BCA- Cu1+

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