Reacciones enzimáticas de oxido reducción -Deshidrogenasa láctica (LDH)

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 2]

“ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS”

UNIDAD ZACATENCO

INGENIERÍA EN SISTEMAS AMBIENTALES

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Practica 9. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA DESHIDROGENASA LÁCTICA (LDH)

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Sección: 1                                                    Grupo: 4AM1

Practica 9. Determinación de la actividad de la deshidrogenasa láctica (LDH).

1.- INTRODUCCIÓN.

Todas las manifestaciones vitales requieren energía, el sistema de transporte electrónico mitocondrial es poco más que una secuencia de reacciones oxido-reducción. Se entiende esta reacción a la transferencia de uno o más electrones de una molécula a otra. La partícula que en una reacción cede electrones, se oxida, mientras que la otra partícula o molécula que recibe los electrones por lo tanto se dice que se redujo. Las grandes cantidades de energía que liberan las reacciones biológicas de óxido reducción constituyen de hecho a la principal fuente de energía disponible para el trabajo de la célula.

Aquellas moléculas que tienen un potencial más positivo tienden a retener sus electrones intercambiables, por tanto los que tienen un potencial más bajo o más negativo tienden a cederlos. Las reacciones de óxido-reducción llevadas a cabo por células son catalizadas por enzimas que actúan como intermediarios hasta llegar al aceptor final de electrones que es el oxígeno.

La lactato deshidrogenasa (LDH) es un enzima NAD dependiente que se encuentra ampliamente distribuida en tejidos animales, vegetales y en microorganismos.

Existen dos tipos distintos de subunidades, M y H, cuyas combinaciones posibles dan lugar a cinco formas moleculares, con actividad lactato deshidrogenasa y con características cinéticas y fisicoquímicas diferentes, que se han denominado isoenzimas.

Es una enzima citoplasmática que se encuentra en forma soluble o ligada a membrana. Las diferentes isoenzimas se encuentran en distintas proporciones en cada tejido, lo cual puede dar idea de la funcionalidad de cada isoenzima, atendiendo a las funciones metabólicas en que intervienen.

Cataliza la siguiente reacción:

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Juega, por tanto, un papel importante en el metabolismo de glúcidos, interviniendo en el último paso de la glucolisis anaerobia y en un primer paso hacia la gluconeogénesis a partir de lactato. Además, aporta combustible al ciclo de Krebs en tejidos consumidores de lactato como el músculo cardiaco. Es específica para L-Lactato y utiliza únicamente NAD como coenzima.

La LDH es una enzima cercana al equilibrio, por tanto, no reguladora, pero sí regulada por la razón NADH / NAD+ y por la posibilidad de presentar formas enzimáticas con características distintas tanto cinéticas como de inhibición por sustrato. La inhibición por exceso de sustrato tiene lugar por la formación de un complejo NAD - piruvato que compite con el NADH por el centro activo del enzima. Asimismo, la LDH presenta inhibición por intermediarios de ciclo tricarboxílico: oxalacetato y citrato. Se conocen otros inhibidores como oxalato y oxamato

2.- OBJETIVOS.

Objetivo General:

Realizar una serie de experimentos en los que pondrá manifiesto la actividad de algunas enzimas que participan en las reacciones de óxido reducción, la importancia de los cofactores y el efecto de algunos inhibidores.

Objetivo Particular:

Observar la actividad enzimática de la enzima LDH y poner de manifiesto las reacciones oxido-reducción en donde participa.

3.- RESULTADOS EN FORMA DE TABLA.

Tabla 1. Resultados del grado de decoloración en la reacción.

Nota. - x Grado de decoloración

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