TRABAJO PRÁCTICO DE SANGRE.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE RÍO CUARTO

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FCO-QCAS Y NATURALES

FISIOLOGÍA ANIMAL

TRABAJO PRÁCTICO DE SANGRE. PARTE 1[pic 1][pic 2]

Año: 2016  

1-FROTIS Y COLORACIÓN DE LA SANGRE

Es un examen de sangre que brinda información acerca del número y forma de las células sanguíneas. Este examen se puede realizar como parte de una evaluación médica general para ayudar a diagnosticar muchas enfermedades o el médico lo puede ordenar si usted tiene signos de un trastorno sanguíneo. Consiste en el extendido de una gota de sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos. La fidelidad de la información obtenida de ellos, depende en gran parte de la calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las células se amontonarían y no podrían ser reconocidas ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las células se deformarían, distorsionarían y destruirían. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que:

-Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados (preferentemente nuevos).

-La gota de sangre usada para la preparación del frotis no debe ser muy grande ni pequeña, de preferencia del tamaño de la cabeza de un alfiler (entre 2 y 3 mm), obtenida por punción capilar.

-La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podría deformarse la morfología celular si pasase esto.

-La lectura de las extensiones se hará en las zonas donde los eritrocitos "casi se tocan".

Objetivo:

-El objetivo de la presente práctica es hacer un extendido de sangre teñirlo y reconocer los diferentes tipos celulares

- Realizar la fórmula linfocitaria relativa

Materiales:

• Sangre humana
• Portaobjetos
• Colorante de Giemsa y MayGrünwald
• microscopio

Metodología

Preparación de frotis

1. Se toma una gota de sangre, la que se coloca en uno de los extremos de un portaobjetos limpio (punto inicial del frotis).
2. Se coloca el portaobjetos sobre una mesada de modo que la gota de sangre quede en el extremo derecho.
3. Se toma otro portaobjetos entre el pulgar e índice de la mano derecha (extensor), el cual se apoya sobre la superficie del otro portaobjetos delante de la gota de sangre
4. Se aproxima el extensor a la gota de sangre, la que se extiende por capilaridad a lo largo del borde de ese portaobjeto.
5. Procurando que ambos portaobjetos formen un ángulo de aproximadamente 45°, se hace deslizar el portaobjetos extensor con una uniformidad y seguridad hacia el otro extremo, dejando detrás una fina película de sangre.
6. Se procede a secar el frotis por agitación del portaobjetos al aire.

Este procedimiento se explica gráficamente en la Figura 1

[pic 3]

Figura 1: Preparación frotis sanguíneo

Coloración del frotis

Los colorantes mas utilizados para la tincion de frotis son el May-Grünwald-Giemsa.

1. Colocar solución de May-Grünwald sobre el frotis y esperar 3 minutos
2. Lavar con agua corriente (1min)
3. Colocar solución de Giemsa diluida (2 gotas en 10 ml de agua destilada) y dejar actuar 15-20 minutos
4. Lavar con agua corriente
5. Dejar secar al aire
6. Observar al microscopio los elementos formes

Fórmula leucocitaria relativa

La fórmula leucocitaria expresa la cantidad de cada tipo de leucocito contando 100 leucocitos totales en un frotis, por lo que se expresa en porcentaje. A esto se lo denomina fórmula relativa. Es necesario recalcar que para apreciar el porcentaje de cada leucocito es necesario que las células se encuentren uniformemente distribuidas en el frotis.

[pic 4]

2. RECUENTO CELULAR CON CÁMARA DE NEUBAUER.

El recuento de células sanguíneas se realiza en una cámara especial denominada Cámara de Neubauer.

También se llama cámara cuentaglóbulos o hemocitómetro. Consiste en una placa gruesa de cristal con forma de porta, cuya porción central está dividida en 3 ejes perpendiculares al eje longitudinal de la cámara. De ellas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0.1 mm con respecto a la central y en esta última hay grabado un retículo cuadrangular (cámara simple).

La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semi bandas idénticas y separadas por un surco paralelo al eje longitudinal de la cámara (cámaras dobles). En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retículo idéntico que facilitará el recuento celular

No todas las cámaras de recuento son iguales, la más utilizada en hematología es la cámara de Neubauer. Se trata de una cámara doble, cuyos retículos (2 al tratarse de una cámara doble) se denominan retículos de Neubauer. La siguiente figura muestra las dimensiones de dicho retículo:

...