Transaminacion facultativa

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OBJETIVO

Cuantificar la actividad de la transaminasa  ALAT/TGP presente    en un extracto crudo de hígado empleando, un método cromatográfico y otro espectrofotométrico.    

RESULTADOS  

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           “CURVA TIPO DEL ACIDO GLUTÀMICO"

CALCULOS

1. µmoles de Acido Glutàmico.

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1. µmoles de Acido Glutàmico reales  

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* Los valores de μmoles de ácido glutámico se obtuvieron de la interpolación en la curva tipo fueron 2.7392 para el problema y 0.5816 para el testigo.

Dado que se realizaron diluciones en problema y testigo con el fin de que los datos entraran en nuestra curva tipo, debemos multiplicar los µmoles por el numero de veces diluidas: para el testigo se realizo  una dilución 1:3 por lo tanto el valor interpolado se multiplica por 3, para el problema el valor interpolado  se multiplica por 2 ya que la dilucion fue de 1:2. Posterior a esto,  se restan los µmoles de problema y testigo para obtener la cantidad de µmoles de Acido Glutàmico reales producidos por la transaminasa.

1. µmoles de Acido Glutàmico reales producidos en el cromatograma

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                x              - 60 [pic 9]

X = 0.1120 µmoles de ácido glutámico reales producidos en el cromatograma.

1. Unidades arbitrarias de Transaminasas (UAT)

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1 g de hígado - 60 mL Regulador

X       - 2mL Regulador

X= 0.033  g de hígado

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 113.1394[pic 13]

DISCUSION DE RESULTADOS

Las reacciones de transaminación están catalizadas por aminotransferasas. Generalmente, la transaminación comporta la transferencia del grupo amino, del glutamato a un alfa-cetoácido, con la formación del correspondiente aminoácido más el derivado alfa-ceto del glutarato. . Existen aminotransferasas  específicas en las células animales para la síntesis de todos los aminoácidos que se encuentran en las proteínas, excepto la treonina y la lisina, en tanto en cuanto se disponga de los correspondientes cetoácidos.

El cofactor para las aminotransferasas es el piridoxal fosfato, procedente de la vitamina B6. Las reacciones de transaminación tienen unas constantes de equilibrio próximas a la unidad, por lo que la dirección en que se produce determinada transaminación está controlada en gran parte por las concentraciones intracelulares de sustrato y producto. Por lo tanto, la transaminación puede utilizarse como un mecanismo de síntesis  o degradación de aminoácidos.

Se realizó la cromatografía en papel, se colocaron en el cromatograma 8 puntos equidistantes, en los primeros 5 puntos se colocaron 5, 10, 15, 20 y 25 µL respectivamente de una solución de ácido glutámico (con estos posteriormente se construyó la curva tipo), en los puntos 6 y 7 se colocó 60 µL de la solución testigo y problema respectivamente, por ultimo al punto 8 se le coloco 5 µL de solución de alanina. Más tarde el cromatograma se saturo durante 2 horas con el disolvente etanol:metanol:agua:urea, se dejó desarrollar cromatograma durante 18 horas aproximadamente. Al sacar el cromatograma se calentó en la estufa a 70°C hasta evaporar el disolvente. Posteriormente se revelo el cromatograma por aspersión de una solución de ninhidrina en etanol. Se observaron en el cromatograma la formación de manchas color morado que se encontraban a una distancia muy similar en el cromatograma, estas manchas corresponden al acido glutámico, y observamos que nuestra mancha problema si se encontraba a la una distancia muy similar a la de las aplicación del ácido glutámico, por lo tanto podemos decir que se obtuvo ácido glutámico, en cambio la mancha de nuestro testigo no se encontraba  a una distancia cercana a la del ácido glutámico, y esto es correcto ya que cuando preparamos los tubos, al testigo no se le adiciono ácido alfa-cetogluratico y por lo tanto la reacción no nos daría ácido glutámico. También  se observan otras manchas de nuestro problema y testigo a la misma distancia que la mancha de la solución de alanina.

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