TÉCNICAS DE PCR
Enviado por Astrid Ruvalcaba • 20 de Febrero de 2022 • Resumen • 557 Palabras (3 Páginas) • 81 Visitas
Se le llama reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a una técnica de laboratorio común que se utiliza para hacer muchas copias, incluso pueden ser millones de alguna parte de ADN, la región puede ser cualquiera que le interese a quien esté haciendo la prueba.
.Es una técnica de laboratorio que se utiliza para hacer las secuencias de ADN más grandes.(Figura 1) El método utiliza partes pequeñas de ADN llamados cebadores para elegir la parte del genoma que se va a hacer más grande. Gracias a esta técnica pueden hacerse un billón de copias de la secuencia en poco tiempo.
El objetivo de la PCR es producir suficiente ADN de la parte que se eligió para que pueda utilizarse de diferentes formas. El ADN que se hizo más grande se puede clonar para otros experimentos.
La PCR se puede utilizar para investigación en biología molecular, el diagnóstico médico e incluso algunas ramas de la ecología.
Las tres etapas:: desnaturalización, alineamiento y extensión del ADN, se repiten de forma continua, en cada nuevo ciclo se agranda simultáneamente la región de interés de las dos cadenas complementarias.
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¿Qué elementos químicos se necesitan?
El elemento principal en la PCR es el ADN que es una molécula que está compuesta por tres cosas: un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, timina, guanina o citosina) que se comnpleta con la base de otra cadena, de tal forma, que el ADN se forma en una doble hélice. Estas bases se unen gracias a los puentes de hidrógeno e interacciones hidrofóbicas, generando estabilidad a la doble hélice, la carga eléctrica del ADN es negativa y está dada por los grupos fosfatos.
En la PCR, el templado son las cadenas de ADN que se separan y sirven como molde para que la enzima sintetice las nuevas cadenas que llevan la secuencia principal. Mientras que, la ADN polimerasa se encarga de la velocidad de la reacción, uniendo las nuevas cadenas de ADN que llevan la bacteria termófila llamada Thermus aquaticus, vive en condiciones de temperatura muy altas y por eso su ADN polimerasa soporta esas temperaturas.
Los primers son secuencias de oligonucleótidos que protegen la secuencia que se desea amplificar y son complementarios a ésta. Su tamaño suele estar entre 15-25 pares de bases y la cantidad de G-C no debe ser más del 55% de la secuencia. Si las reglas no se siguen, existe la posibilidad de la formación de dímeros de primers, es decir, de productos inespecíficos. Lo que afectaría en el rendimiento de la reacción, así como en la probabilidad del resultado que se espera.
La Taq polimerasa
La PCR necesita de una enzima ADN polimerasa que haga nuevas cadenas de ADN por el uso de las cadenas existentes como molde. La ADN polimerasa que normalmente se utiliza en la PCR se llama Taq polimerasa.
Su ADN polimerasa es muy
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