Explique la técnica PCR

1. Explique la técnica PCR (Reacción en cadena de polimerasa). Aplicaciones en medicina.

Reacción en cadena de polimerasa(PCR) tiene como objetivo obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir una única copia de ese fragmento original, o molde.

Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formados entre si tras cada fase de replicación y, a continuación, de que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.

PCR está automatizado mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reacción para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de reacción.

Entre las aplicaciones médicas de la PCR cabe destacar su aporte al desarrollo de nuevas estrategias de diagnóstico.

• Permite detectar agentes infecciosos como los virus de las hepatitis B y C o regiones del genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV).

• Ha sido aplicada, para diagnosticar la presencia o ausencia de HIV en recién nacidos de madres seropositivas, pues la existencia de anticuerpos maternos impide obtener resultados confiables, con los métodos convencionales, durante el primer año de vida.

• También ha facilitado el diagnóstico de enfermedades tales como las hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis quística, e hizo posible reconocer mutaciones de genes vinculadas con enfermedades oncológ icas.

• Su sensibilidad permite detectar poblaciones residuales de células cancerosas en pacientes sometidos a quimioterapia y de este modo se ha podido determinar, con una antelación en extremo valiosa, un nuevo avance de la enfermedad.

• Por otra parte, existen ya modos de evaluar a través de la PCR el riesgo de padecer dolencias tales como diabetes de tipo I y la enfermedad celíaca.

2- Explique la técnica de ELISA (Enzyme-Linked Inmuno Sorbent Assay) directo y sus aplicaciones en medicina.

La técnica de ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) es utilizada para ladetección de muy diversas moléculas biológicas, basándose en la especificidad delreconocimiento antígeno-anticuerpo y en la sensibilidad de las pruebas enzimáticasLa técnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimático ampliamente empleado en el áreamédica para la cuantificación de moléculas especialmente de aquellas que experimentancambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias, virus, hongos o parásitos o fases activas de enfermedades autoinmunes. Como ejemplo se pueden medir por ELISA hormonas, autoanticuerpos, inmunoglobulinas contra antígenos de patógenos,toxinas, antígenos. Las técnicas de ELISA son también muy usadas en los ensayos denuevos medicamentos para comprobar sus efectos cuantificando las moléculas de interésen cada caso. Existen numerosas variantes de este tipo de ensayo. Entre ellos se encuentranlos métodos directo e indirecto.El método directo permite la detección del antígeno con un anticuerpo específicoconjugado con una enzima como sistema de marcaje.En el método indirecto el antígeno reacciona con el anticuerpo específico. El complejoantígeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo anticuerpo que reconocedominios constantes de anticuerpos. Este anticuerpo, que suele ser específico de especie, esel que está marcado enzimáticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado seacapaz de detectar diferentes antígenos.En ambos métodos, la reacción enzimática puede ser detectada espectrofotográficamentecon un lector ELISA. ELISA Directo: Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados. Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo que dará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea. Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

Concepto La técnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimático

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