FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA III

DOCENTE: QF. Graciela Sánchez Silva Santisteban

GUÍA DE PRÁCTICAS

DE BIOQUÍMICA III

DOCENTE: Q.F. Graciela Sánchez Silva S.

INTRODUCCIÓN

El progreso en la ciencia se realiza mediante la observación y experimentación. Este aspecto es particularmente importante en la Bioquímica, que es un área de la ciencia en donde se han realizado prodigiosos avances en las últimas décadas gracias al desarrollo de nuevos métodos de estudio y técnicas experimentales.

Este manual de práctica de Bioquímica incluye una breve explicación de las técnicas más utilizadas en la investigación Bioquímica a decir la potenciometría, espectrofotometría, cromatografía, electroforesis, centrifugación y otros.

Con la instrumentación de estas técnicas bioquímicas se pretende que al terminar el curso, los alumnos estén inmersos e interesados en la experimentación que es la base de la Bioquímica.

Para la comprensión de las prácticas se requiere que se familiaricen con los contenidos teóricos de cada experimento, los mismos que contienen una lista de referencias que sirven en el análisis y elaboración del marco teórico. Al inicio se realizará una breve explicación de las técnicas y los procedimientos que deben emplearse en el laboratorio.

Cada experimento llevará el nombre de la práctica, un marco teórico, fundamento, competencias, interpretación clínica, materiales y equipos, procedimientos, resultados, conclusión, cuestionario, fuentes de información basado en el sistema Vancouver.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA III

PRÁCTICA N° 2: OBTENCIÓN DE LECITINA A PARTIR DE LA YEMA DE HUEVO

MARCO TEÓRICO

Lípidos son aquellas sustancias orgánicas extraíbles de tejidos animales o vegetales, por medio de solventes orgánicos como éter, cloroformo, tetracloruro de carbono, benceno, etc. Los lípidos son insolubles en agua, son sustancias de suma importancia, porque constituyen formas de almacenamiento de energía y porque forman parte de estructuras celulares, principalmente de todo tipo de membrana biológica.Los lípidos extraídos de material biológico representan una gran variedad de moléculas, estructuralmente diferentes, pero que comparten la propiedad de ser solubles en solventes orgánicos, llamados por eso, solventes de las grasas.Entre los lípidos existen moléculas no polares, como los triacilgliceroles, o triglicéridos, y moléculas polares como los fosfoglicéridos, o fosfolípidos, y los esfingolípidos, y moléculas de tipo terpenoides los esteroides, los terpenos y algunas vitaminas. .Entre los fosfoglicéridos más comunes, tenemos a los tres derivados del ácido fosfatídico, a saber: fosfatidil colina, fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina. A los fosfatidil colina se les conoce con el nombre genérico de lecitinas. Existen varias lecitinas dependiendo de los ácidos grasos que contengan esterificados en los carbonos alfa y beta glicerol.

LECITINAS: Las lecitinas son moléculas polares que existen en forma de sales internas, ya que contienen a carga negativa del ácido fosfórico, y la carga positiva del grupo trimetilamino de la colina. El pH isoeléctrico de una lecitina pura es generalmente de 6,7 o un poco mayor, lo cual concuerda con su estructura anfótera.

Las lecitinas puras son sustancias blancas de aspecto grasoso, que cuando se exponen a la luz y al aire toman una coloración café, debido a la autooxidación y descomposición. Son solubles en los solventes ordinarios de las grasas, excepto en acetona.Esta propiedad se emplea para su aislamiento. Son higroscópicas y se mezclan bien con el agua formando soluciones coloidales nebulosas.La identificación de la lecitina puede hacerse por saponificación, para separar los ácidos grasos, hidrolisis para separar la colin y después probar para presencia de colina.

FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA

Se separará primero la yema de huevo por los medios manuales o mecánicos. En la yema se encuentran las lecitinas en gran abundancia y además el colesterol en suficiente cantidad para hacer su aislamiento y detección fácil.

Una vez separada la yema se hará una extracción general de lípidos con solventes orgánicos. Algunos autores afirman que una mezcla cloroformo-éter a partes iguales es el mejor solvente para la extracción de los lípidos. En ésta práctica se usará una mezcla etanol-éter 2:1. Se aprovechará el hecho de que las lecitinas son insolubles en acetona para obtener su fácil precipitación. Después de precipitar las lecitinas, quedan en solución muchas otras clases de lípidos entre los cuales está el colesterol. Se hace entonces una saponificación para separar la fracción saponificable y quedarse con la insaponificable donde se encuentra el colesterol. Bastará entonces solubilizarlo bien y agregar agua para precipitarlo, ya que es insoluble en agua. Se precipita en forma cristalina.

MATERIAL

PRIMERA PARTE SEGUNDA PARTE

1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml con tapón Vaso de precipitados de 250 ml

Probeta de 50 o 100 ml Agitador

Embudo 6 tubos de ensayo de 13x10

Vaso de precipitados de 250 ml Pipeta de 5 ml

Vaso de precipitados de 100 ml Probeta de 50 o 100 ml

Vaso de precipitados de 50 ml Baño María

Agitador Embudo

Baño María Gradilla

Mechero, triple y tela de asbesto Mechero, triple y tela de asbesto

PROCEDIMIENTO

OBTENCIÓN DE LECITINA

1. Separe la yema de huevo y vacíela en un Erlenmeyer de 250 ml. Hágalo con cuidado, de preferencia en el lavatorio, procurando siempre la limpieza. La clara se descarta.

2. Añada 50 ml de alcohol etílico y 25 ml de

...