Microscopia

MICROSCOPIA

PRACTICA DE LABORATORIO N° 2

MICROSCOPIA

OBJETIVOS

• Identificar cada una de las partes del microscopio y aprender a utilizarlos correctamente

• Formular y enumerar los cuidados básicos que se debe tener en cuenta en el uso y manejo del microscopio durante las sesiones de practica

MARCO TEORICO

EL MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento diseñado para ser posible la observación y examen de seres muy pequeños o los elementos formativo de uno de ellos y que están fuera de la visibilidad adecuada del ojo humano. Hay varios tipos de microscopio, los más usados y conocidos son los microscopios simples o lupa, los microscopios compuestos y el microscopio binocular estereoscopio, luego podemos encontrar otros tipos de uso más especializado en determinados campos de la biología y otras ciencias. El más revolucionario en el campo biológico es el microscopio electrónico que usa como fuente de funcionamiento un chorro de electrones

El microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observación de mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio más simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mínimo a esa distancia.

El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la información. La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espécimen o muestra, la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración.

Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.

Existen distintos microscopios ópticos generales y de investigación que se diferencian en factores tales como la longitud de onda de la iluminación, del espécimen o muestra , la alteración física de la luz que incide en la muestra y procesos analíticos que se aplican a la imagen final.

Microscopio compuesto

SISTEMA ÓPTICO

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

SISTEMA MECÁNICO

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular

REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.

MATERIALES Y METODOS

• Microscopio

• Aceite de inmersión

• Xilol

• Papel filtro o papel de arroz

• Papel milimetrado

• Letra “e” minúscula recortada de periódico o revista

• Hebras de hilo

• Recorte de una figura o foto de revista

• Laminas portaobjetos

• Laminas cubreobjetos

• Gotero

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.

b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión (100x)

Para realizar el proceso descrito anteriormente se utilizara como muestra o preparación una letra “e” minúscula y una hebra de hilo, las cuales se colocaran sobre el centro de un portaobjetos con el lado de debajo de la letra hacia arriba en el caso de la “e” minúscula. Ponga una gota de agua sobre la muestra. Después de esperar unos segundos hasta que el agua haya empapado el papel, coloque la laminilla (cubreobjetos) sobre la preparación, si quedan algunas burbujas de aire se presiona ligeramente la laminilla con un lápiz hasta que desaparezcan y continúe con el proceso

6. Dibujar lo que observa en cada aumento observado

Empleo del objetivo de inmersión (100x) : Bajar totalmente la platina

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión

c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre la muestra en la lámina portaobjetos.

d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión

e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente

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