Modelo murino Thy-1 Crh-2 YFP y técnica CLARITY.

INDICACIONES

Realice una búsqueda en la bibliografía acerca del modelo murino Thy-1 Crh-2 YFP.

1. Desarrolle un ensayo acerca de cómo funciona este modelo neuroanatómica y molecularmente.

2. Compárelo con otros modelos semejantes.

3. Indique sus ventajas y desventajas con respecto a técnicas inmunofluorescentes regulares

Realice una búsqueda en la bibliografía acerca de la técnica de Clarity.

1. Desarrolle un ensayo acerca de la metodología para realizar esta técnica.

2. Compárela con otras técnicas semejantes.

3. Indique sus ventajas y desventajas con respecto a técnicas inmunofluorescentes regulares

MODELO MURINO THY1-CHR2-EYFP

El promotor Thy1 es un antígeno precursor de las células T en el timo, presente en los timocitos murinos. La canalrodopsina-2 (ChR2) es una proteína que actúa como un interruptor neuronal ya que, al ser administrada al cerebro, se aloja en la membrana celular, y esta (al ser sensible a la luz), cuando es expuesta a una luminiscencia despolariza la membrana (abriéndola) permitiendo el paso de partículas. La EYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein) es un gen mutante de la proteína verde fluorescente (GFP), la EYFP es una de las más usadas debido a sus características fluorescentes (una de las más brillantes proteínas) y sus útiles propiedades para la microscopía fluorescente.

El Thy1-ChR2-EYFP es inyectado al genoma del ratón. Con estos ratones transgénicos es posible realizar diferentes estudios morfológicos como la optogenética, en la que se puede controlar la activación de las células exponiéndolas a la luz azul, mediante el interruptor ChR2. Con este estudio es posible controlar células cerebrales específicas del ratón, como sus movimientos. La canalrodopsina-2 está adherida con la proteína amarilla fluorescente, para hacer visible los circuitos neuronales y los tipos celulares. Estas proteínas están bajo el control del antígeno (Thy1).

Existen diferentes modelos similares al Thy1-ChR2-EYFP como el Omp-ChR2-EYFP. La cual usa el promotor Omp, que es una proteína asociada únicamente a las neuronas receptoras olfativas. El ratón responderá a los estímulos de olor.

Otro modelo similar sería el Vglut2-ChR2-YFP, donde el Vglut2 es un transportador de glutamato vesicular que se encuentra en las neuronas de la región locomotora de la médula espinal. Cuando se activa el ChR2, se crea una fotoestimulación de las neuronas glutamatérgicas, que son las que generan y controlan las actividades rítmicas que se generan en el aparato locomotor.

El modelo Thy1-ChR2-EYFP tiene un parecido con las técnicas inmunofluorescentes, debido al uso de las proteínas fluorescentes, pero aun así este modelo tiene sus ventajas y desventajas con respecto a esas técnicas. Una de las ventajas podría ser que con el modelo murino no es necesario fijar la muestra y permear la membrana para permitir la penetración de anticuerpos y con este modelo es posible etiquetar la totalidad de la morfología de algunas neuronas, como los axones y de las terminaciones nerviosas. Las desventajas podrían ser que son sensibles a los iones de cloruro, y que en las técnicas fluorescentes se pueden obtener resultados más rápidos puesto que para el modelo murino se necesita primero activar la proteína ChR2.

BIBILIOGRAFÍA

http://www.technologyreview.es/biomedicina/35560/una-tecnica-para-recuperar-la-vista/

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3433654/

http://www.microscopyu.com/articles/livecellimaging/fpintro.html

https://www.jax.org/strain/007612

CLARITY

Clarity es un método creado por Karl Deisseroth y colegas de la Universidad de Stanford, con el cual es posible extraer los lípidos del cerebro u otros órganos a partir de una técnica de limpieza, lo que causaría que los órganos se vuelvan estructuras transparentes, ya que los lípidos son los que les dan color. A partir de esto, el órgano puede ser inducido a técnicas de tinción para localizar estructuras

...