ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN

ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN

(Durante la germinación)

INTRODUCCIÓN:

El almidón es un polímero formado por la unión de moléculas de α - D - glucosa, unidas mediante enlaces glucosídicos a - 1 —> 4. Cerca del 20% de la mayoría de los almidones es amilosa y el 80% amilopectina. Existen dos tipos de almidón:

Amilosa: Molécula linear de almidón que está constituida por muchos anillos de glucosa unidos entre sí para formar largas moléculas que no tienen ramificaciones. Está compuesta de aproximadamente 200 a 2000 moléculas de glucosa unidas por enlaces glicosídicos a-1,4 en cadenas no ramificadas.

Amilopectina: Molécula del almidón que tiene ramificaciones y está constituida por muchos anillos de glucosa unidos entre sí para formar largas moléculas con numerosas ramificaciones laterales cortas. Las moléculas de amilopectina son significativamente más grandes que las moléculas de amilosa; algunas contienen entre 10000 y 20000 unidades de glucosa. La amilopectina es esencialmente insoluble en agua caliente.

[pic 1]Estructura de amilosa

[pic 2]Estructura de amilopectina

Mecanismo identificación.

 Yodo sobre el almidón
El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración azul-violeta intensa y el glicógeno y las dextrinas por formación de coloración roja.
La amilosa en soluciones neutras forma una hélice,, la cual presenta de 6-8 unidades de glucosa por cada vuelta. La amilosa y el yodo forman un complejo, el cual es de azul oscuro y es convencionalmente utilizado para cuantificar el contenido de amilosa en el almidón. La amilosa tiene una capacidad de enlazamiento con el Yodo de orden de 20 mg de este por cada 100 mg de amilosa con una longitud de onda máxima de 620 a 640 nm.
Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el ​yodo presente en la ​solución de un ​reactivo llamado ​Lugol​. La amilosa​, el componente del almidón de cadena lineal, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro. La ​amilopectina​,1​ ​​ el componente del ​almidón de cadena ramificada, forma hélices mucho más cortas, y las moléculas de yodo son incapaces de juntarse, obteniéndose un color entre naranja y amarillo. Al romperse o ​hidrolizarse el almidón en unidades más pequeñas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrólisis, cuando ya no hay cambio de color constituyendo una evidencia experimental ampliamente utilizada.

OBJETIVO: Demostrar la actividad de la amilasa en semillas de frijol.

MATERIAL:

• Pipeta de 10ml
• 3 cajas petri
• 1 vaso de precipitado
• 1 estufa de incubación 25•C
• 12 frijoles
• 1 gotero
• ¼  papel Manila
• 1 regla transparente
• Lápiz graso
• 3 alfileres
• 1 navaja
• 3 frascos Gerber
• Algodón

METODOLOGÍA

[pic 3]

REACTIVOS

• Agar nutritivo adicionado con almidón(200 mg de algodón / 100 ml de medio)

RESULTADOS

[pic 4]

Acción de la amilasa sobre el medio con respecto al tiempo. Línea fuerte mitades A, lineales débiles mitades b

[pic 5]

Promedio de las mediciones experimentales

DISCUSIÓN

Durante el proceso de revelado con el Lugol, el medio de cultivo  adquirio una coloración amarilla y el contorno de la semilla del frijol adquirieron una coloración azul-violeta que indica la presencia de almidón. Este suceso se explica porque el medio de cultivo es un agar adicionado con almidón y la semilla posee aún en el momento de revelado cantidades considerables del almidón para la germinación.
Las semillas poseen cantidades importantes de reservas alimenticias, que permitirán el crecimiento y el desarrollo de la planta hasta que esta sea capaz de hacerlo por sí misma. Estas reservas se encuentran en los cotiledones de la semilla, y para movilizar estas reservas es necesario un proceso previo de hidrólisis para descomponer poco a poco los compuestos de menor peso. El responsable de esta hidrólisis es la amilasa, enzima presente en todas las semillas.La B-amilasa que está presente en mayor medida actuará al final de la cadena generando diaacaridos como la maltesa que son más fáciles de aprovechar , mientras que la alfa-amilasa generará dextrinas que son más difíciles de aprovechar.
La manchas traslúcidas indican la hidrólisis del almidón presente en el agar, por parte de la amilasa,otro lado el radio de las zonas traslúcidas fue mayor en aquellas semillas que tenían mayor área de contacto con el medio: mitades . La temperatura de la estufa tuvo un papel importante para la actividad óptima de la enzima, así como el tiempo transcurrido influyó en la progresión del radio de la zona traslúcida.

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