AMINOACIDOS: CURVAS DE TITULACION Y SEPARACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.

AMINOACIDOS: CURVAS DE TITULACION Y SEPARACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.

EVER FINO1, ALEJANDRO VALENCIA2, YAIR ZAPATA3

RESUMEN

Se comprobó el carácter anfoterico de algunos aminoácidos, como: glicina, tirosina, tripotofano y una muestra problema, y se determino mediante curvas de titulación, los valores de pK de los grupos ionizables, y se hallo el punto isoeléctrico de los aminoácidos. Además se separo e identifico una mezcla de aminoacidos utilizando el método de cromatografía en capa fina.

Palabras calves: aminoácidos, anfoterico, titulación, cromatografía.

INTRODUCCION

Una molécula anfótera se define como aquella que posee la capacidad de comportarse como un ácido o como una base dependiendo del pH del medio donde se encuentre. Éste es el caso de los aminoácidos: al tener un grupo carboxilo pueden desprender protones (H+) por lo que tienen carácter ácido; por otra parte, al poseer un grupo amino, son capaces de aceptar protones (H+) y, por tanto, también tienen carácter básico.

El pH que se encuentra en los medios biológicos es aproximado a pH=7, es por esto que ambos grupos tanto como el amino y el carboxilo se encuentran ionizados y los amino-ácidos aparecen como iones dobles a esto se suele llamar ión zwitterión, o ion hibrido.

A un medio donde el pH es más ácido, los aminoácidos tendrán carga neta positiva, pues el grupo carboxilo ionizado capta los H+ del medio, neutralizándose y quedando únicamente la carga del grupo amino. Por el contrario, en un pH más básico, el grupo amino cederá un H+ al medio y el aminoácido quedará con carga negativa. Como cualquier otra molécula los aminoácidos tienen curvas de titulación características en las cuales se pueden encontrar los valores de pK que están relacionados con los grupos ionizables ya mencionados anteriormente, en la curva de titulación se puede denotar el punto isoeléctrico que se ve reflejado por su conformación y sus grupos –R que también son ionizables los cuales contribuyen a la carga.

El punto isoeléctrico es el valor de pH para el cual un aminoácido tiene carga neta 0, es decir, posee tantas cargas positivas como negativas, y debido a que cada aminoácido posee grupos R o cadenas laterales diferentes, tendrá de la misma manera un punto isoeléctrico diferente.(1)

La cromatografía adoptada por el botánico ruso Mikhail Tswett recordado como el padre de la cromatografía estableció las ventajas de la misma. La cromatografía técnica en la que se da una separación muy versátil en la que se producen dos fases una móvil y una estacionaria. la sustancia de interés se adhiere a la fase estacionaria o se mueve con la fase móvil, y viaja a una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. (2)

METODOS

En la práctica de laboratorio se realizo la prueba de cromatografía en capa fina, para esto utilizamos dos placas recubiertas con gel sílice a las cuales se le hicieron las las lienas bases donde se sembraron los aminoácidos. Luego se procedió a introducir las placas en la camara de cromatografía hasta que se observo cierta humedad en la parte superior de la placa. Cuando esto sucedió, las sacamos y marcamos el avance alcanzado (línea final). Dejamos secar y aplicamos ninhidrina para colorear los aminoácidos, luego se llevo a una estufa por un tiempo y se observo el avance de cada aminoácido.

Para la prueba de titulación se utilizaron aminoácidos, HCl al 0.1M y NaOH al 0.1M con los cuales se determino el pH de los aminoácidos Glicina y Metionina a diferentes volúmenes dependiendo de la solución utilizada para titular ya sea HCl o NaOH,

RESULTADOS

Placa 1 Centímetros recorridos Placa 2 Centímetros recorridos

Línea final (a) 4,5 cm Línea final (a) 4,2 cm

Glicina 1,0 cm Triptófano 2,5 cm

Tirosina 1,6 cm Muestra problema Mancha 1 1,2 cm

Mancha 2 2,8 cm

Tabla 1: Separación por cromatografía en capa fina.

Retención final

Rf: b

a

Donde b, distancia recorrida del aminoácido y a, distancia línea final.

Placa 1:

• Rf glicina: b glicina = 1,0 cm = 0,22

a placa 1 4,5 cm

• Rf tirosina: b tirosina = 1,6 cm = 0,35.

a placa 1 4,5 cm

Placa 2:

• Rf triptófano = b triptofano = 2,5 cm = . 0,59

a placa 2 4,2 cm

• Muestra problema

• Rf mancha 1 = b1 mancha 1 = 1,2 cm = 0,28

a placa 2 4,2 cm

• Rf mancha 2 = b2 mancha 2 = 2,8 cm = 0,66

a placa 2 4,2 cm

TABLAS DE TITULACION DE GLICINA

Vol. HCl (mL) pH de Glicina Vol. HCl (mL) pH de Glicina

0 5,23 28 2,06

1 3,87 29 2,03

2 3,6 30 2

3 3,42 31 1,98

4 3,24 32 1,95

5 3,17 33 1,93

6 3,04 34 1,9

7 3,02 35 1,88

8 2,93 36 1,85

9 2,88 37 1,83

10 2,81 38 1,79

11 2,75 39 1,76

12 2,7 40 1,72

13 2,65 41 1,69

14 2,6 42 1,66

15 2,56 43 1,65

16 2,5 44 1,63

17 2,46 45 1,62

18 2,42 46 1,61

19 2,38 47 1,58

20 2,34 48 1,57

21 2,31 49 1,56

22 2,26 48 1,53

23 2,23 49 1,52

24 2,2 50 1,51

25 2,16 51 1,5

26 2,12 52 1,44

27 2,09

Tabla 2: Titulación de Glicina con HCl

Vol. NaOH (mL) pH de Glicina Vol. NaOH (mL) pH de Glicina

0 6,16 26 10,54

1 8,07 27 10,67

2 8,25 28 10,81

3 8,46 29 10,92

4 8,69 30 11,67

5 8,85 31 11,35

6 8,99 32 11,52

7 9,04 33 11,69

8 9,14 34 11,74

9 9,23 35 11,81

10 9,32 36 11,87

11 9,4 37 11,94

12 9,47 38 11,98

13 9,55 39 12,02

14 9,62 40 12,06

15 9,68 41 12,09

16 9,76 42 12,12

17 9,83 43 12,14

18 9,89 44 12,17

19 9,96 45 12,19

20 10,03 46 12,21

21 10,1 47 12,23

22 10,18 48 12,25

23 10,25 49 12,26

24 10,35 50 12,29

25 10,44

Tabla 3: Titulación

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