Alimentacion

LABORATORIO # 1: ALIMENTACIÓN:

Distribución de las enzimas digestivas

Introducción:

Entre los vertebrados y muchos invertebrados la digestión es totalmente, un proceso extracelular a través del cual los materiales alimenticios complejos se reducen a unidades orgánicas simples, apropiadas para la absorción. El tracto digestivo de una cucaracha es un tubo modificado en subdivisiones que sirven a funciones digestivas especializadas: recepción de alimento, conducción y almacenamiento, trituración interna y digestión, absorción, conducción y formación de heces. Las enzimas digestivas están localizadas de forma bastante precisa a lo largo del tracto digestivo. En este ejercicio se determinará, mediante el uso de sustratos apropiados, la actividad de las enzimas específicas de las diferentes regiones del tracto digestivo de la cucaracha.

Materiales

-Se recomiendan etapas adultas, o ninfas grandes, de la cucaracha tropical americana Blaberus. También resulta satisfactoria la cucaracha americana Periplaneta.

- Película fotográfica velada, equipo de disección, marcador, guantes desechables, cajas petri, tubos de ensayo, gradillas, pinzas, baños maría, estufa, beakers, bureta, pHmetro, morteros, algodón o gasa, pipetas de 1 y 5 mL

Reactivos

- Salino para insectos (7,5 g de NaCl en 1 l de agua destilada).

- Solución de sacarosa al 5 %: 5 g de sacarosa/ 1 00 mI de salino para insectos.

- Invertasa 0,5 %: (Sacarasa) en salino.

- Amilasa 0,5 % en salino.

- Lipasa 0,5 % en salino.

- Tripsina 0,5 % en salino.

- Solución de Benedict: Disolver 173 g de citrato sódico y 100 g de carbonato sódico anhidro en 600 mI de agua destilada caliente. Disolver 17,3 g de sulfato cúprico en 150 mI de agua destilada. Lentamente, y mediante agitación constante, añadir la solución de sulfato cúprico a la solución de citrato sódico-carbonato sódico. Diluir con agua destilada hasta 1 litro.

- Solución de almidón al 1 %: Disolver 1 g de almidón soluble en 10 mI de agua. Añadir 90 mI de solución saturada de NaCl y hervir mientras se agita. Enfriar y guardar en lugar refrigerado.

-Eter

-Fenolftaleína

- Solución de yodo: Yoduro potásico al 2 % en agua destilada. Añadir suficiente yodo elemental para colorear de amarillo oscuro.

- HCl diluido (0.001 N)

- Solución de sal biliar: Coleato sódico (extracto biliar de buey) 1 g/100 mI de agua.

- Hidróxido sódico 0,1 N: 4 g/litro. Preparar soluciones 0,005 y 0,001 N mediante dilución apropiada.

- Aceite de oliva

PROCEDIMIENTO

Se probará la presencia de enzimas hidrolíticas en las siguientes partes del tubo digestivo de la cucaracha: glándulas y depósitos salivares, buche, tubo digestivo medio con los ciegos unidos, y tubo digestivo posterior (ver figura). Específicamente debe comprobarse la presencia, de sacarasa, amilasa, proteasa y lipasa.

Extraer los tractos digestivos de tres cucarachas, que han sido anestesiadas con dióxido de carbono o eter. Si se usa Periplaneta en vez de Blaberos use de 3 a 5 animales por grupo. Corte con unas tijeras el ano, libre de pared corporal. Extraiga el tubo digestivo completo de la cucaracha, manteniendo al animal en salino de insecto, y tire con pinzas de la cabeza, a la que esta unido el tubo digestivo. Si se rompera el tubo digestivo entre el proventrículo y la región media, abrir el abdomen ventralmente y extirpar la porción posterior. Consultar el diagrama e identificar las glándulas salivares, el buche, el proventrículo, con los ciegos unidos, el tubo digestivo medio y el tubo digestivo posterior, con los túbulos de Malpighi, y el recto.

Abrir, mediante una hendidura, el tubo digestivo (excepto las glándulas salivares) y mantenerlo de esta forma con las pinzas, lavar vigorosamente en una cubeta de salino para insecto, a fin de eliminar cualquier resto de alimento; es de importancia realizar un completo lavado. Aislar las cuatro regiones del tubo digestivo que van a estudiarse y recogerlas en distintos morteros de porcelana donde serán triturados en 1 ml de salino para insecto para extraer los enzimas. Después de la trituración, dejar que el tejido repose. Mediante una pipeta, transferir cada región macerada con salino a un tubo de ensayo limpio y marcado. Llevar el volumen de cada extracto a 1 mI con salino de insecto. Después, pipetear aproximadamente 0.1 mI de cada extracto en un quinto tubo de ensayo (los cinco extractos combinados en un tubo). Calentar este extracto combinado durante 10 a 15 min en un vaso de precipitados conteniendo agua hirviendo, a fin de desnaturalizar los enzimas presentes. Enfriar y obtener un volumen de 1 mI con salino para insecto. Este tubo servirá como control apropiado para las pruebas enzimáticas.

Hecho esto ya se está preparado para probar la actividad enzimática de los extractos de tejido.

1. Sacarasa (invertasa): Colocar en cada uno de seis tubos 1 mI de sacarosa al 5 % (sustrato). Transferir unos 0,2 mI de cada uno de los extractos a cada uno de estos tubos y marcarlos con la respectiva región. En el quinto tubo añadir aproximadamente 0.2 mI del enzima desnaturalizado para usado como control. En el sexto tubo añadir unos 0.2 mI de invertasa al 0.5 %. Colocar todos los tubos en baño de agua a 30 °C durante una hora.

Después de la incubación investigar

...