DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES Y TOTALES EN REFRESCO HIT SABOR PIÑA-NARANJA POR EL METODO DE ACIDO DINITROSALICILICO (DNS)

DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES Y TOTALES EN REFRESCO HIT SABOR PIÑA-NARANJA POR EL METODO DE ACIDO DINITROSALICILICO (DNS)

Jeyner Cuello López 1; Dayana Marriaga Lozano1; Dailer Rangel Gonzalez1; Diego Segura Bermúdez1

1 Estudiante VI Semestre de la Universidad de Córdoba; Facultad de Ingenierías; Programa de Ingeniería de Alimentos; Análisis de Alimentos; Sede  

Orientadora: Doc. Claudia Denise De Paula
[pic 1]

Resumen

La práctica de laboratorio llevada a cabo en la universidad Córdoba, con sede en Berástegui tuvo por objetivo determinar por el método de ácido Dinitrosalicilico (DNS) el contenido de azúcares reductores  en el refresco hit  sabor piña-naranja, para tal objeto se estableció una  curva patrón una solución de glucosa a diferentes concentraciones, posteriormente se procedió a estimar la concentración de azucares reductores en la muestra determinando su grado de absorbancia a575 nm. El proceso arrojo un resultado de 317,93 mg/ml de azúcares presentes en la muestra de refresco hit sabor a piña/naranja.

INTRODUCCIÓN

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrogeno y oxígeno. Todos los carbohidratos son azucares pequeños, solubles en agua (glucosa y fructosa, por ejemplo) o bien cadenas, como el almidón y la celulosa, que se elaboran enlazando subunidades de azúcar. ( Audesirk, Audesirk, & Byers, 2003)

En la naturaleza, los carbohidratos se presentan como monosacáridos (azucares simples), oligosacáridos (contienen de dos a diez unidades monosacáridas) y polisacáridos (glúcidos poliméricos más grandes).

Los monosacáridos se clasifican en aldosas si tienen grupo aldehído y cetosas si tienen un grupo cetona. Todos los monosacáridos, aldosas o cetosas y la mayoría de los disacáridos son azucares reductores (excepto la sacarosa) porque uno de sus dos carbonos anoméricos no está formando enlace glucosídico. (Berg,Stryer, & Tymoczko, 2008)

El método DNS es una técnica colorimétrica que emplea 3,5-ácido dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra, seguido de la determinación espectrofotométrica a 540nm de los azúcares reductores.

Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o para cuantificar los productos de una reacción enzimática. Por lo tanto, se aplicará esta técnica para la construcción de una curva patrón de glucosa que será una referencia para experimentos posteriores.

Los azucares reductores son compuestos que se encuentran en la gran mayoría de los productos alimenticios por lo cual se hace indispensable conocer sus propiedades y características al igual que el uso que se les puede dar para la transformación y elaboración de nuevos productos. Esta práctica tuvo como  objetivo la determinación de los azucares reductores presentes en el refresco hit piña-naranja utilizando el método 3,5-ácido dinitrosalicílico.

MATERIALES Y MÉTODOS

La práctica de determinación de azucares reductores por el Método de ácido dinitrosalicico (DNS), se llevó a cabo en el laboratorio de Análisis de Alimentos de la universidad de Córdoba, ubicada en el corregimiento de Berástegui, Cienaga de Oro. 

Para el desarrollo del Método de ácido dinitrosalicico (DNS), se elaboró una curva patrón, para la cual se partió de una solución patrón de glucosa con una concentración de 1000ppm.

Posteriormente en tubos de ensayo se realizaron soluciones de glucosa a concentraciones de 0, 200, 400, 600, 800 y 1000 (ppm), a partir de la muestra patrón obtenida con anterioridad.

Seguidamente se adiciono 1 de reactivo de DNS a cada uno de los tubos y se agito fuertemente en el vortex, luego se  llevó a ebullición durante 5 minutos y se enfrió rápidamente en baño de hielo, se adicionaron 8 mL de agua destilada dentro de cada tubo y se agito  nuevamente  en el vortex, por último se procedió  a leer la absorbancia a 575nm en un espectrofotómetro, donde se observaron y se anotaron los resultados obtenidos,  con los cuales se procederá a realizar una gráfica de concentración vs absorbancia para hallar la ecuación representativa gráfica y el R2.[pic 2]

DETERMINACION DE AZUCARES EN LA MUESTRA DE REFRESCO HIT SABOR PIÑA-NARANJA.

Para llevar a cabo la determinación de los azucares reductores presentes en un jugo hit sabor piña-naranja, se tomó una muestra la cual se diluyo es un matraz de 50mL, la cantidad de muestra de jugo necesaria para la concentración requerida se  calculó teniendo en cuenta un contenido de 26g de azúcar en 250mL del refresco.

Concentración:

= 104,000ppm[pic 3]

C1V1= C2V2

V1=[pic 4]

V1= = 0,24 mL[pic 5]

Posteriormente se tomó 1ml de la dilución en tres tubos de ensayo y se les adiciono 1mL de reactivo DNS, se agito fuertemente cada tubo en un vortex, y se sometieron  a ebullición durante 5 minutos, seguidamente se realizó un proceso de enfriamiento rápido en baño de hielo. Después se le adicionaron 8ml de agua destilada dentro a cada tubo y se agitó en un vortex. Por último se realizó la lectura de la  absorbancia a 575nm y se anotaron los resultados, para determinar  la concentración de azúcar del refresco hit piña-naranja, remplazando el valor de la absorbancia de la muestra problema en la ecuación de la curva patrón.

RESULTADOS

Al obtener los resultados de la lectura de absorbancia realizada a una longitud de onda de 575nm, se procede a realizar la gráfica absorbancia Vs concentración.

TABLA 1. LECTURA DE ABSORBANCIA MUESTRA PATRÓN A 575 nm

GRAFICA 1. ABSORVANCIA Vs CONCENTRACIÓN SOLUCIÓN PATRÓN

[pic 6]

La ecuación obtenida para relacionar la absorbancia contra la concentración de azucares reductores es:

C = [pic 7]

Dónde: C= concentración de azucares reductores (mg/mL)

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