Determinación del metabolismo de Bacterias en Medio OF

Determinación del metabolismo de Bacterias en Medio OF

1. Resumen

Uno de los métodos ocupados para definir si una bacteria usa la vía fermentativa u oxidativa es el uso del agar OF, que define con cambios de pH y coloración (verde a amarillo si se acidifica). Vibrio cholerae se conoce como una bacteria gram negativa, oxidasa positiva que crece en la mayoría de los cultivos. En el texto siguiente se aborda un experimento dado con agar OF en 6 tubos con carbohidratos diferentes; lactosa, fructuosa, sacarosa, maltosa y glucosa (2). Se depositaron las bacterias en agar OF con los diferentes sustratos. Se le agregó aceite mineral a los tubos excepto a un tubo que contenía glucosa, todo con el objetivo de obtener un medio anaerobio y observar si la bacteria es capaz de fermentar u oxidar o ambas, de igual manera se pretende observar que carbohidratos son degradados.

Palabras clave: Medio OF, Vibrio cholerae, carbohidratos, fermentación, oxidación.

2. Introducción

Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos como nutrientes por vía fermentativa u oxidativa. En el caso de bacterias anaerobias, fermentan los carbohidratos y las facultativas pueden fermentarlos o degradarlos de manera oxidativa, en el caso de las aerobias estrictas sólo pueden oxidarlos. Un método muy usado para saber de qué manera degrada los carbohidratos una bacteria muestra es usar agar OF (agar, peptona y azul de bromotimol como indicador de pH). El medio es verde en un principio, con pH aproximado de 7, cuando existe presencia de fermentación u oxidación, sea el caso, la muestra se acidifica y adquiere un color amarillo, indicando un pH de 6 aproximadamente. Con ello, también se define qué tipo de carbohidratos ocupa la bacteria para nutrirse y qué residuos secreta a partir de la degradación de éstos.[pic 1]

Vibrio cholerae (Figura 1) es una bacteria del tipo gram negativa, esta tiene una forma de bacilo curvo y por lo general causa el cólera en los seres humanos. Pertenece a la subdivisión de las proteobacterias.  

[pic 2]

Bioquímicamente, da positivo en pruebas de la catalasa y oxidasa, ésta bacteria de igual manera es sacarosa y manitol positiva y también nitrato reductasa. Ésta es una bacteria anaerobia facultativa, por lo tanto es capaz de sobrevivir con o sin presencia de O2 y posee un metabolismo fermentador que puede ser capaz de fermentar en diversos sustratos tales como la glucosa, sacarosa o fructosa, etc. Son bacterias que poseen una amplia movilidad gracias a una flagelación polar.

El NaCl favorece su crecimiento y la bacteria tolera pH alcalinos, es por ello que se utiliza para su cultivo agua de peptona alcalina.

Sus requerimientos ambientales: el rango de temperaturas de crecimiento están entre 16 y 42° C con un óptimo de 37° C, con un rango de pH de 6.8 a 10.2 y un pH óptimo de 7.0 a 8.0. Hábitat natural: Se lo ha encontrado en ambientes marinos en regiones templadas o tropicales, en lagos y ríos, en moluscos y crustáceos, en pájaros y herbívoros aún lejos de las costas marinas. El número de bacterias va disminuyendo a medida que la temperatura del agua baja (por debajo de 20° C).

Forman pequeñas colonias continuas circulares de color amarillo que muy pocas veces correrán más allá de su cultivo. En pruebas comunes no fermentan la lactosa, no producen gas ni H2S.

3. Metodología

1. Se preparó el medio OF en un medio semisólido con diferentes carbohidratos; fructuosa, glucosa, lactosa, sacarosa y maltosa. Se depositaron en diferentes tubos.
2. Se tomó un tubo de medio con diferente sustrato, y dos tubos de glucosa.
3. Se seleccionó una caja Petri que contenía Vibrio Cholerae.
4. Con apoyo de un asa bacteriológica y una lámpara para esterilizar, se tomó una muestra del cultivo bacteriano, mediante un barrido suave y se agregó de manera cuidadosa al medio.
5. Inmediatamente se agregó aproximadamente 2ml de aceite mineral para simular el medio anaerobio.
6. Se esterilizó el asa bacteriológica y se repitió el proceso con los demás tubos.
7. En el caso del segundo tubo de glucosa, no se le añadió el aceite mineral, con el objetivo de comparar qué es lo que ocurría con la bacteria en un medio anaerobio y uno aerobio.
8. Se incubaron las muestras a una temperatura de 37C° (óptimo para su crecimiento) durante 24hrs.
9. Se observaron y recopilaron los resultados.

4. Discusión de resultados

Después de aproximadamente 24 horas después de la inoculación de la bacteria elegida en cada medio OF con su respectivo carbohidrato. Se notó de manera cualitativa los siguientes resultados (Tabla 1).

 Tabla 1. Resultados donde se observa la degradación de los carbohidratos.

[pic 3][pic 4][pic 5][pic 6][pic 7][pic 8][pic 9]

Figura 2 Resultados de los medios en el cual se aplicó Vibrio Cholerae; 1) Sacarosa 2) Fructuosa 3) Maltosa 4) Glucosa sin aceite mineral 5) Glucosa 6) Lactosa.  No existió un cambio de coloración en el tubo 6.

Como se pude observar (Figura 2), en el medio OF con sacarosa, fructosa, sacarosa, glucosa sin y con   respectivamente, cambió de color, es decir hubo fermentación. Mientras que en medio OF con sustrato lactosa, como se puede ver en el tubo 6, no cambió de color, por lo tanto indica que el proceso de fermentación no se llevó a cabo ni el proceso oxidativo.[pic 10]

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