Determinación mohos y levaduras

UNIVERSIDAD CATOLICA SANTA MARIA

PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

PRACTICA N° 5

DETERMINACION DE LA CURVA DE CRECIMIENTO, EFECTO DE FACTORES EXTERNOS

 OBJETIVOS

1. Conocer las fases de una curva de crecimiento.
2. Observar la velocidad de crecimiento.
3. Calcular parámetros cinéticos (/*, td) característicos de las especies bacterianas.  

Introducción

El crecimiento se da como crecimiento individual donde se observa el incremento en el tamaño y peso de cada microorganismo y crecimiento poblacional incremento en el número de células por la división celular.

Se considera la Tasa de Crecimiento como el cambio del número de células o masa por unidad de tiempo.

Las fases de crecimiento de una población bacteriana pueden determinarse midiendo la turbidez del cultivo. Aunque dicha turbidez no es una medida directa del número de células, su incremento es una indicación del crecimiento bacteriano.

Para estas determinaciones se utiliza un espectrofotómetro, en el cual la luz pasa a través del cultivo bacteriano hasta alcanzar una célula fotoeléctrica conectada a un galvanómetro. A medida que la concentración celular aumenta, el cultivo se hace más turbio, y se reduce la cantidad de luz transmitida que alcanza la célula fotoeléctrica, como consecuencia de la difracción de la luz por parte de las células.

Existen factores que influyen en el crecimiento como factores externos ambientales como T°, P°, H2O,  pH, O2, CO2, factores nutricionales como N y C y factores internos como la capacidad metabólica.

CICLO DEL CRECIMIENTO POBLACIONAL:

El ciclo de crecimiento poblacional de bacterias se puede dividir en varias fases por lo que varía la curva de crecimiento. Dichas fases son:

• Fase de retardo o de Retraso (fase “lag”): Es el período de tiempo durante el cual el inóculo se adapta a las condiciones del medio fresco sobre el que se ha sembrado. Es un período de ajuste metabólico. Puede ser breve o largo. Su duración depende de varios factores: tamaño del inóculo; estado metabólico previo del inóculo, etc.

El valor del tiempo de generación (g) depende de: composición del medio, temperatura, pH, osmolaridad, etc.

Varía el desarrollo dependiendo de las características de la bacteria si ésta es vieja o es un cultivo nuevo.

Es una fase de preparación y de adaptación al medio, su duración depende del medio de cultivo  y el estado fisiológico de las células vivas.

• Fase de crecimiento exponencial (= fase logarítmica): Esta fase se debe a que cada célula entra en la fase exponencial con desfase respecto de sus compañeras. Ello demuestra que las células del inóculo no están todas en las mismas condiciones fisiológicas.

Durante la fase logarítmica se da un crecimiento balanceado no restringido durante unas pocas generaciones. Cada célula se divide para formar dos células, cada una de ellas forma otras dos células y así sucesivamente. La mayoría de estos organismos unicelulares crece exponencialmente. La velocidad de crecimiento exponencial varía mucho de un organismo a otro, unas bacterias crecen muy rápidamente y otras muy lentamente. Las condiciones ambientales afectan a la velocidad de crecimiento exponencial, tales como la temperatura, la composición del medio de cultivo, etc.

• Fase estacionaria: Previa una fase de aceleración negativa, de crecimiento desequilibrado, esta fase se caracteriza porque el coeficiente neto de crecimiento se hace nulo (m = 0), pero aún existe crecimiento. Lo que ocurre es que el crecimiento bruto se equilibra con las muertes celulares. Hay limitación de nutrientes especiales y se acumulan sustancias de desecho.

En ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa u otros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan un metabolismo diferente al de la fase de exponencial y durante ella se produce una acumulación y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener importancia en el curso de las infecciones o intoxicaciones producidas por bacterias.

El crecimiento se detiene, los nutrientes indispensables se detienen

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• Fase de muerte exponencial: Se da muerte y lisis masiva, exponencial, del cultivo. Se debe al agotamiento de reservas de energía.  

Visitar la siguiente dirección para observar un modelo de curva de crecimiento:

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